皂角刺总黄酮诱导结肠癌HCT116细胞凋亡作用研究（可编辑）.doc

皂角刺总黄酮诱导结肠癌HCT116细胞凋亡作用研究 l 皂角刺总黄酮诱导结肠癌HCTll6细胞凋亡的作用研究…1 1．1 中文摘要………………………………………………………1 1．2 英文摘要………………………………………………………3 1．3 前言……………………………………………………………6 1．4 材料与方法……………………………………………………10 1．5 结果……………………………………………………………19 1．6 讨论……………………………………………………………26 1．7 结论………………………………??????…………………………34 1．8 参考文献………………………………………………………35 1．9 英汉缩略词对照表……………………………………………38 2 致谢……………………………………………………………39 3 皂角刺抗肿瘤作用机制研究新进展 综述 ．…．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．??．??????????”??????????????????????…??????…????????????????”40 附l论文独创性及授权书…………………………………………50 附2已发表综述……………………………………………………5l Ⅷ四四删四四Ⅲ ． Y1 784753 16细胞凋亡的作用研究 皂角刺总黄酮诱导结肠癌HCTl 摘 要 目的：细胞凋亡，是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程 序，由基因调控的主动死亡的过程，诱导肿瘤细胞凋亡是治疗恶性肿瘤的重 要途径之一。皂角刺总黄酮 FlaVonoids仔om Spina 皂角刺中提取分离得到的黄酮类化合物，前期研究结果显示，皂角刺总黄酮 对多种肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用。本研究通过检测皂角刺总黄酮 对体外培养的人结肠癌细胞HCTll6增殖的影响，观察细胞凋亡的形态学变 化、凋亡率和Caspase．3的活性水平变化，从细胞水平和分子水平探讨皂角刺 总黄酮诱导肿瘤细胞凋亡的作用，旨在阐明其抗肿瘤作用的机制，为临床应 培养，每3天传代一次。取对数生长期的细胞作实验对象，用不同浓度 12．5、 用CCK一8试剂盒 CeU Counting 和Hoechst33258荧光染色观察诱导细胞凋亡的形态学变化，流式细胞仪 刺总黄酮对细胞凋亡超微结构的影响，用Caspase．3活性检测试剂盒检测皂角 刺总黄酮对凋亡细胞中Caspase．3蛋白活性的影响，并用统计学软件处理实验 数据。结果：不同浓度 12．5、25、50、100、200mg??LJ 的皂角刺总黄酮处 着药物浓度的增加，抑制作用越强，但以作用48小时的抑制作用最强，抑制 78．03士10．38 ％mg??L～，半数抑制浓度IC50为104±0．96mg??L．I。皂角刺总黄酮 作用于HCTll6细胞48小时后，髓染色可见不同程度的核固缩、胞体变小、 染色质凝聚深染和细胞贴壁率下降等改变。Hoechst33258荧光染色显示，不 同浓度的皂角刺总黄酮溶液干预HCTl16细胞后，可见核浓缩、致密的强荧 式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示，皂角刺总黄酮可诱导HCTll6细胞凋亡， 凋亡率随着药物浓度的增高而变大，与阴性对照组比较，差异有统计学意义 尸 O．01 。 黄酮处理后的细胞出现线粒体肿胀，细胞质浓缩，核固缩，核内染色质聚集 于核膜内侧成团块状或新月状等凋亡改变。与对照组比较，Caspase．3蛋白的 活性显著增强 尸 0．05 ，表明其可能参与了诱导HCTl16细胞凋亡的作用机 制。结论：皂角刺总黄酮能明显抑制人结肠癌HCTll6细胞的增殖，且呈现 出一定的浓度依赖性。皂角刺总黄酮能诱导人结肠癌细胞HCTll6细胞凋亡，