基因治疗课程-梁旻1.ppt

核酶 Cech等在1981年发现，四膜虫26S RNA前体中含有居间序列（IVS），在rRNA前体成熟中，IVS通过剪接反应被去除，而rRNA前体的剪接无须蛋白质催化的转磷脂反应，作者认为这是一种自我剪接反应，同时提出RNA具有酶的活性的概念。1983年 Altman又发现在较高阳离子浓度下，RnaseP中的RNA本身即可催化rRNA前体成熟，而其蛋白组分却不具备此功能。Cech称这种具有催化作用的RNA为核酶。 锤头状核酶 1 份 200～300份 100,000份 反义核酸对疾病的治疗 反 义 药 物 治 疗 的 疾 病 与基因相关疾病 病毒病 传染病 肿瘤，心血管疾病，哮喘，关节炎，牛皮癣，遗传性疾病等 肝炎，HIV，流感，疱疹等 研 究 反 义 核 酸 的 公 司 Gilead 公司 Hybridon 公司 Genta 公司 Lynx公司 ISIS 公司 Innovir 公司 Sequitur 公司 AVI Biopharma 公司 Novo Pharm Biotech 公司 反义药物临床研究 美 国 ISIS 公 司 1989年成立于San Diego,从事反义药物开发和小分子药物筛选 1995年与Boehringer Ingelheim合作开发细胞粘附因子有关的反义核酸药物 1997年7月与CIBA Vision达成全球分销VitraveneTM的协议,获得里程碑收入2千万美元 1998年12月与Zeneco 公司建立反义药物开发合作 1999年1月与Abbott公司建立合作 1999年与Merk公司合作开发治疗丙型肝炎类药物,合作期三年 截止1998年9月,ISIS拥有现金7300万美元,债券1700万美元 第 一 个 反 义 药 物 上 市 1998年8月26日，美国FDA批准第一个反义药物VitraveneTM上市 1999年4月，EMEA批准VitraveneTM在欧洲上市 逆转录病毒载体： 特点： 可感染分裂细胞； 整合到染色体中； 表达时间较长； 有致癌的危险； 适用范围： Ex vivo基因治疗； 肿瘤基因治疗。 逆转录病毒载体 逆转录病毒载体的制备和转染 Replication cycle: Attachment Entry DNA synthesis (RT) Form provirus RNA Protein Assembly and budding Moloney鼠白血病病毒载体 常用的是鼠源的PA317细胞。在PA317细胞内已经转染了gag、pol、env基因。将含有目的基因的缺陷病毒转入PA317细胞，就可以产生完整的病毒颗粒，并分泌于培养基中。 3-10 Kb Promoters or IRES X-Linked SCID Clinical Trial Alain Fischer, Hopital Necker, Paris 11 patients 1-9 months old Bone marrow aspirate - selection of CD34+ progenitors 3 daily exposures to retroviral vector carrying ?c chain cDNA Reinfusion of marrow X-Linked SCID Clinical Trial Follow up 3-13 months In 10 of 11 patients T cells NK cells B cells Reconstituted to Normal Numbers Normal immunological responses to vaccination Return Home October 2002 - December 2002 2nd child with T cell leukemia - at 34 months Insertion 40 kb upstream of LMO2 (3rd child with LMO2 insertion - currently well) WBC 7,000 ?? T cells ? 300,000 + splenomegaly Transgene insertion into the 1st intron of the LMO2 gene 1st child with T cell leukemi