第8章 脂类化合物的提取分离.ppt

第一节 脂类化合物的提取分离方法 第二节 提取分离实例 第一节 脂类化合物的提取分离方法 一、脂类化合物的分类 二、脂类化合物的存在形式 三、脂类化合物的提取分离方法 机械压榨法、水代法、 皂化法、有机溶剂萃取法 四、脂类化合物的纯化方法 丙酮沉淀法、层析分离法、 尿素包合法、结晶法、蒸馏法 一、脂类化合物的分类 ② 类脂类主要有磷脂、脑苷脂、固醇及蜡等。磷脂也是一种甘油酯，但与中性脂不同，主要是甘油上的3个羟基中有一个不是与脂肪酸结合，而是与磷酸胆碱相连。不同的磷脂有不同的溶解性质，如脑磷脂不溶于丙酮而溶于氯仿和乙醚，卵磷脂不溶于冷乙醇而溶于热乙醇，神经磷脂则不溶于乙醚。 这些溶解性质的差别常作为提取分离磷脂化合物的依据。类固醇化合物都不溶于水，而溶于有机溶剂。 实际上，脂类化合物往往是互溶在一起的，依据脂溶性这一共同特点归为一大类，并非是一个准确的化学名词。脂类化合物药物在临床上有重要的生理生化和药理药效作用，具有很好的营养、预防和治疗效果。 二、脂类化合物的存在形式 选择提取溶剂时，疏水结合的脂，一般用非极性溶剂提取，如乙醚、氯仿、苯等。 与生物膜相结合的脂质，要用相对极性较强的溶剂提取，以断开蛋白质分子与脂类化合物分子之间的氢键或静电力。 共价结合的脂质不能用溶剂直接提取，要先用酸或碱水解，使脂质分子从复合物中分裂出来再提取。 三、脂类化合物的提取方法 碱水解时不可逆，甘油三酯水解成能溶于水的脂肪酸钠或钾（即肥皂）和甘油，此过程称为皂化。 皂化液再经酸化处理，即分离析出高级脂肪酸。不被皂化部分如固醇等通过皂化反应后与甘油酯分开，可进一步用有机溶剂提取纯化。目前从动物油脂中制取油酸和脂肪酸，即用皂化法。 4. 有机溶剂萃取法 在生物脂类化合物的提取分离中，常用有机溶剂萃取方法，它主要根据不同油脂化合物在不同溶剂和不同条件下溶解性质的差别而进行分离。 在实际操作中，常常采用几种有机溶剂组合的方式进行，以醇为组合溶剂的必需组分。 醇能裂开脂质-蛋白质复合物，溶解脂类化合物和使生物组织中脂质降解酶失活。醇溶剂的缺点是糖、氨基酸、盐类等也被提取出来。 要除去水溶性杂质，最常用的方法是水洗提取物，但可能形成难处理的乳浊液。 采用氯仿：甲醇：水=1：2：0.8（V/V）组合溶剂提取脂类化合物，提取物再用氯仿和水稀释，形成二相体系，氯仿和甲醇：水=1：0.9，水溶性杂质分配进入甲醇-水相，脂类化合物进入氯仿，基本上可防止以上现象产生。 在提取时一般在室温下进行，防止其过氧化和水解反应。如必要时，可在低于室温条件下操作。对于不稳定的脂类化合物，应尽量避免加热。用含醇的混合溶剂，能使许多脂酶和磷脂酶失活。对稳定的酶，可将提取材料在热乙醇或沸水中浸1～2min，使酶失活。 提取脂类化合物中采用的有机溶剂，要保证新蒸馏过，不含过氧化物。 在提取高度不饱和脂质类化合物时，溶剂中要通入N2驱除空气，操作中应置于N2下进行。不可使脂类化合物提取物完全干燥或在干燥状态下长时间放置，应尽快溶于适当的溶剂中。 此外，脂类化合物容易被氧化和被水解，因此提取物不宜长期保存。 如果要保存可溶于新蒸馏的氯仿：甲醇=2：1（V/V）的溶剂中，充满溶剂，于－15～0℃保存，时间较长者（l～2年），必须加入抗氧化剂，保存于－40℃。 四、纯化方法 1. 丙酮沉淀法 利用不同的脂类在丙酮中的溶解度不同而实现分离的目的。操作简单，效果好。用于磷脂分离，大部分磷脂不溶于冷丙酮，中性脂类则溶于冷丙酮，这样可从脂类的混合物中，把磷脂与中性脂类分离开，制备纯品。 2．层析分离法 吸附层析是在制备规模上分离脂质混合物常用的有效方法。它是通过极性和离子力，还有分子间引力，把各种化合物结合到固体吸附剂上。 脂质混合物的分离是依据单个脂质组分的相对极性而进行的，是由分子中极性基团的数量和类型所决定的，也受分子中的非极性基团的数量和类型的影响。 一般通过极性逐渐增