山东大学研究生国家课程_基因克隆.pptVIP

 基因克隆 基因工程的基本过程 目的基因的获得 载体DNA及其改造 体外DNA重组 重组DNA的转化 重组子的筛选、鉴定与克隆扩增 目的DNA在受体细胞中的表达 基因工程过程示意图 概 述 基因克隆（Gene cloning）：是通过分子生物学技术获得一段基因或DNA片段的大量拷贝，从而对该基因进行研究或应用的过程和技术，又称为DNA克隆。 目的基因：基因克隆中所扩增的基因，又称为外源基因（foreign DNA）。 DNA重组：利用酶学的方法，在体外将不同来源的DNA进行特异性切割，并重新拼接，组合成一个新的杂合DNA分子的过程。 一、目的基因的获得 已知基因的获得 化学合成法 PCR扩增法 未知基因的获得 构建基因组文库利用鸟枪法克隆目的基因 构建cDNA文库，筛选目的基因 mRNA差异显示技术筛选差异表达基因 差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因 I 已知基因的获得 化学合成法 DNA化学合成仪 多聚合酶链反应（PCR） DNA 体外扩增技术 Oligo DNA的人工化学合成是从1967年以后开始兴起的。随着科学技术的进步，DNA合成仪的完善，现在一般都采用固相亚磷酸三酯法，使用全自动DNA合成仪进行Oligo DNA的合成。Oligo DNA合成是由3→5进行合成的，一般3的第一个碱基结合在Glass担体（Controlled Por