超微戊己丸复方和单味药抑菌作用探究.docVIP

超微戊己丸复方和单味药抑菌作用探究 　　摘要：目的 探讨戊己丸及其各单味药对胃肠道内6种常见（条件）致病菌的抑制作用，并比较超微药物与常规药物的抑菌效果。方法 采用药敏纸片法及二倍稀释法研究各药物的抑菌能力及最低抑菌浓度（MIC）。结果 黄连水煎液能够抑制除沙门氏菌以外的所有供试菌种；吴茱萸的抑菌谱和抑菌作用相对较小，对绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌表现出一定的抑制作用；白芍仅对金黄色葡萄球菌具有抑制作用。对于药物敏感菌，通过MIC比较发现，戊己丸及其单味药超微药剂的抑制效果明显优于常规药剂。结论 戊己丸能够抑制胃肠道内常见（条件）致病菌的生长，且超微粉体能够提高药物的利用度。 关键词：戊己丸；超微中药；最低抑菌浓度；抑菌作用 基金项目：国家自然科学基金；湖南省中医药管理局课题（201250）；湖南中医药大学校级青年教师科研基金8） 通讯作者：谭周进，E-mail：tanzhjin@ 戊己丸系《太平惠民和剂局方》收载名方，由黄连、吴茱萸和白芍3味药组成，戊己丸主治胃痛吞酸、腹痛泄泻。现代研究表明，超微戊己丸对胃肠道内微生物菌群具有明显的调控作用[1-2]，其单味药黄连、吴茱萸和白芍也均具有一定的抗菌作用[3-5]。中药超微粉碎技术[6]是使中药材细胞破碎的粉碎，可将 药材粉碎至15 ?m左右，在此种粒径下，不会引起药效物质基础的改变，且可增强药效[7]。本研究选用胃肠道内常见的几种（条件）致病菌为对象，探讨戊己丸及其单味药在体外对供试菌的抑制作用，并比较超微中药和常规中药的抑菌能力，为戊己丸治疗胃肠道疾病机理及超微粉体在中药生产中的应用提供一定的借鉴。 1 材料与方法 1.1 药物制备 将黄连300 g、炒吴茱萸50 g、炒白芍300 g制成各单味药常规粉和超微粉（0.01～500 ?m粉末），由湖南省中医药研究院中药超微工程技术研究中心鉴定并提供。根据戊己丸组方配比称取戊己丸常规粉和戊己丸超微粉各6.5 g（黄连3 g、白芍3 g、吴茱萸0.5 g），分别添加8倍体积水，均煎煮20 min。1500 r/min离心5 min，去上清液后均浓缩至6.5 mL，即戊己丸水煎液，浓度为1 g原药材/mL。 称取黄连、吴茱萸、白芍3味药的常规粉和超微粉各6 g，每味药物均加8倍体积水煎煮20 min。1500 r/min离心5 min，去上清液后均浓缩至6.0 mL，即黄连超微粉、黄连常规粉、吴茱萸超微粉、吴茱萸常规粉、白芍超微粉和白芍常规粉水煎液，浓度均为1 g/mL。 1.2 培养基 细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；真菌：马铃薯培养基[8]。 1.3 供试菌种 分别取活化好的白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、产气杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌菌种，接种到对应的液体培养基，摇床50 r/min振荡培养24 h，制成一定浓度（约108～109 cfu/mL）的活菌悬液，备用。 1.4 药物对供试菌抑菌效果检测 抑菌实验所使用的圆形滤纸片直径均为6 mm，高压湿热灭菌后烘干，备用。取已制备好的浓度为1 g/mL的各药物水煎液，0.7×105 Pa灭菌20 min，用于药敏纸片抑菌试验。将滤纸片在药液中浸泡1 h后置于无菌环境晾干备用。将牛肉膏蛋白胨培养基和马铃薯培养基灭菌后倒入无菌培养皿中，待凝固后，分别在对应的培养基中加入0.1 mL已制备好的菌悬液，用涂布棒涂布均匀，将晾干的滤纸片放在培养皿中相应位置。以无菌水代替药液作为对照。每个药物浓度设置3个重复。置于适宜温度下培养24～36 h，量取抑菌圈直径（mm），并求其平均值[9]。 1.5 二倍稀释法测定药物最低抑菌浓度 采用二倍稀释法，将已制备好的浓度为1 g/mL的各药液稀释为1000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.82 mg/mL。0.7×105 Pa灭菌20 min，用于测定药物最低抑菌浓度（MIC）。将滤纸片在药液中浸泡1 h后置于无菌环境晾干备用。待培养基在培养皿中冷却后，分别在培养基中加入0.1 mL已配好的菌悬液，用涂布棒涂布均匀，将晾干的滤纸片放在相应位置[8]。每个药物浓度设置3个重复。置于适宜温度下培养24～36 h，量取抑菌圈直径（mm），并求其平均值[9]。 1.6 统计学方法 采用DPS v7.05统计软件进行分析。计量数据用―x±s表示，两组间均数比较用t检验。P0.05），虽然超微药物的抑菌圈大于常规药物，但两两比较差异无统计学意义（P0.05）。结果见表1。 2.2 最低抑菌浓度 2.2.1 戊己丸对供试菌种的最低抑菌浓度 选取1 g/mL戊