《动物寄生虫病学》许金俊-动物常见寄生虫病病原的传代与冻存.docVIP

动物常见寄生虫病病原的传代与冻存 寄生虫的动物保种，是将其感染期接种于实验动物，使虫体在动物体内存活，以利于寄生虫与寄生虫病的研究、寄生虫病诊断以及制备教学标本等。一、血吸虫 实验动物一般用18～22g体重的健康小白鼠或2～4kg家兔。钉螺尾蚴逸出将阳性钉螺2～3只放入（1×7cm）中加入去氯水或冷开水至管口，管口盖以铜丝网，以防钉螺爬出置25℃孵育4～12小时，尾蚴可陆续逸出浮于水面。逸出将小白鼠或家兔仰卧固定在木板上剪去腹毛，范围约5×5cm约1～2张盖片大小），用清水洗净腹部皮肤。沾取液面的尾蚴置于盖玻片上，在解剖镜下计算尾蚴数量。通常感染小白鼠每只50条尾蚴，家兔500～800条即可。将含已计数尾蚴的盖玻片，翻转覆盖在动物腹部的去毛处，使其与皮肤接触，同时在盖片与皮肤之间滴加少许清水，以保持湿润冬季应保持温度在25℃左右，15～20分钟后取下盖片。感染后约40～45天，即能在动物粪便中查到虫卵。操作中应防止感染，用过器材应消毒。 华支睾吸虫 常用实验动物有犬、猫、豚鼠、大白鼠、兔等。含有华支睾吸虫囊蚴的鱼肉，用人工消化液消化后收集纯净的囊蚴。将囊蚴拌入饲料喂食或直接从口内插入橡皮管注入胃内。感染囊蚴的数量，因动物大小而异，以200～400个为宜。感染后一个月，即可自粪便内检获虫卵。人工消化液配方盐酸0.4ml胃蛋白酶 25g蒸馏水100ml 三、卫氏并殖吸虫 常用实验动物有犬、猫。将感染该种吸虫囊蚴的溪蟹或蝲蛄，放入清水中洗净后，用研钵或绞肉机捣碎，经筛过滤去除粗壳渣，以沉淀法反复清洗至水清。吸出沉渣放在双筒解剖镜下检查，用滴管吸取囊蚴并计数，将定量囊蚴拌入饲料喂动物。也可将囊蚴放入含有2%胆酸盐溶液中，置40℃1小时脱囊。用无菌生理盐水洗涤后，给猫或犬进行腹腔注射。幼虫数量以100～300个为宜。约2个月后可在粪便中检出虫卵毛虫 将感染旋毛虫的小白鼠（或大白鼠）杀死，剥皮，取其肌肉也可取含有幼虫的猪肉，剪成米粒大小，取1小块肉置在载玻片上压片检查，以含有100～200个幼虫囊包量的肌肉，经口喂健康小白鼠，喂前应饥饿小鼠24小时或将含有幼虫包囊的肌肉剪碎，置于含有消化液的三角瓶内，一般每1g肌肉加入60ml的消化液，置37～40℃温箱中，经10～18小时（此间经常摇动烧瓶或搅拌），去掉上层液，然后以水洗沉淀法或离心沉淀法收集幼虫。以生理盐水洗涤2～3次，用1ml的注射器和8号针头吸取100～200条幼虫，经腹腔注射或喂饲健康小白鼠（或大白鼠）。感染第5周后，可在鼠肌中（以膈肌、腿部肌多见）可找到幼虫囊包。幼虫在动物体内可生存3个月或半年。 杜氏利什曼原虫无鞭毛体 取的组织匀浆，用适量生理盐水稀释后，注射于田鼠（或金黄地鼠）腹腔内，每只鼠注射0.5ml，放笼内饲养。一个月后杀死田鼠，取其肝、脾组织作涂片，染色，镜检。转种时将感染利肝曼原虫的田鼠解剖，取其肝、脾置于消毒的组织研磨器中或研钵中，加入少量生理盐水研磨为匀浆后，再加适量生理盐水稀释，用消毒注射器吸取稀释液注射健康田鼠腹腔内，每只鼠注入0.2～0.5ml，继续饲养。3～4周后，按前述方法进行检查。原虫在动物体内可生存数月。 、弓形虫 ～注射于体重18～25g的健康小白鼠腹腔内作涂片检查（查滋养体）。如为阴性再取肝、脾、脑组织研磨为匀浆，按1:10量加入无菌生理盐水稀释，进行第二次接种。如仍为阴性可用同法进行2～3次，再观察结果。阳性者可作接种传代，每2周一次，以保种。～抽取病鼠腹腔液方法是在其腹部作一切口，用镊子夹提腹部的皮肤和腹膜，用1ml注射器吸取1ml生理盐水，迅速注入腹腔，轻揉腹壁，使生理盐水和腹腔液混匀，然后再抽出腹腔液检查。低温保存 用液氮保存原虫，具有保持原虫生物学特性，且保存时间较长的优点。现介绍弓形虫的低温保存方法。 用无菌注射器吸取10% DMSO 2ml，注入感染4天的小鼠腹腔，抽洗2次，抽出液混匀后即注入无菌塑料管内（0.5～1ml/管）封口（或盖严）后将之放入标明批号的纱布袋中，装于液氮罐的提筒内，先置于液氮罐的颈部，该处约为-70℃，30分钟后，置液氮中（-196℃）冻存。在冻存1～2年，需要时从液氮罐中取出保种的小管，迅速投入37～40℃温水中，经4～5分钟即溶化。取冻存的弓形虫分别经腹腔接种2只小鼠，每只0.2ml，观察致病情况也可接种后4～5天分别取鼠血或腹腔液，作涂片，姬氏液染色，镜检原虫。