《动物寄生虫病学》许金俊-动物寄生虫标本的采集、保存和制作.docVIP

动物寄生虫标本的采集、保存和制作 一、吸虫的采集、固定与制片 1、采集 吸虫宜用弯头针、弯头镊、毛笔挑取，小型的或以吸管吸取，不可以镊子夹取，以免损伤虫体，影响观察。体表附着的污物应该放在生理盐水中以毛笔轻轻刷去，或密闭容器开口充分振荡，除去污物。吸虫的肠内容物过多时，可在生理盐水内放置过夜，待其食物消化或排出。这种洗净而尚未固定的虫体是半透明的，应先镜检观察。 2、固定 在制作染色封片标本之前，须先把虫体压薄，固定。较小的虫体应先在薄荷脑溶液（薄荷脑24g，溶解于10ml 95%酒精中，使用前滴一滴于100ml水中）中使虫体松弛。常用的固定方法有如下几种。 （1）劳氏摇动法固定 适用于小型吸虫。将小型吸虫放入盛满生理盐水的试管中，摇动3min，使虫体下沉，倒去一半盐水，加入等量饱和升汞醋酸液，再摇1min，移入纯饱和升汞液中15～30min，再移入75%含碘酒精液中，至不褪色，然后放入70%酒精液中长期保存。 （2）饱和升汞醋酸溶液固定法 将放在生理盐水中伸张好的吸虫，放入加温至60～70℃的饱和升汞醋酸溶液（饱和升汞98ml，加冰醋酸2ml）中，固定后将虫体移入 50%酒精中，洗去升汞液。然后再移入75%酒精碘溶液中。2～3h后，再换到70%酒精中长期保存。 （3）福尔马林固定法 将洗净、伸张好的吸虫放于两玻璃片之间，稍加压力压平，玻片两端用胶皮圈缚住，不可过紧，以免压坏虫体。放入 10%福尔马林液中3～7天，然后移入3%福尔马林液中长期保存。小型虫体可不通过10%福尔马林液．直接放入3%的福尔马林液中。 固定时候标本应用铅笔书写的标签标明标本的详细资料如编号、采集地点、宿主、、寄生部位等等，一式两份，分别置于瓶内外。 3、制片 吸虫标本的形态观察，常需制成整体染色装片标本或切片标本。切片标本制作过程同组织切片的制备，整体装片标本的制法如以下两种。 （1)德氏苏木素染色法 取保存于70%酒精内的虫体逐步通过50%、30%酒清液各0.5h。置蒸馏水内0.5h。放入德氏苏木素染液内2～24h。用蒸馏水换洗后依次移入30%、50%、7O%酒精中各0.5h。用含2%盐酸、70%酒精液褪色至全部构造清晰。用70%酒精换洗两次，如加碱性溶液于酒精中，标本呈蓝色。依次移入89%、90%、100%酒精中各0.5h。再移入冬青油与纯酒精各半的混合液内0.5h。然后移入冬青油或木馏油中透明。透明后用阿拉伯树胶封片。 （2）硼砂洋红染色法 将保存于福尔马林中的虫体先用蒸馏水冲洗数次，依次移入30%、50%、70%酒精中各0.5～1h。将虫体移入硼砂洋红染液中30min至数小时（视虫体大小而定）。移入含2%盐酸的70%酒精液中褪色适宜为止。再依次移入8O%、90%、100%酒精中脱水1～2h。置于纯酒精与冬青油各半混合液中0.5～1h。然后移入冬青油中透明、封片。 德氏苏木素染液配制：苏木素1g溶于l0ml纯酒精中，然后加入l00ml饱和氨明矾液，放于日光下14～28天，再加入25ml甘油、25ml甲醇，置3～4天后过滤即成。使用时用蒸馏水冲淡 10～15倍。 硼砂洋红染液配制：4% 硼砂水溶液 100ml，加入洋红1g。煮沸熔化，再加 70% 酒精 100ml，24h后过滤即成。 二、绦虫的采集、固定与制片 1、采集 绦虫的挑取和洗净方法同吸虫，但由于头节易断离，动作宜轻。如果绦虫头节附着在肠壁上很牢，应将附有绦虫的肠段连同虫体一起剪下，浸入生理盐水中数小时，头节会自行脱离肠壁。 2、固定 绦虫肌肉发达，伸缩力强。节片还要压薄后固定。大型绦虫一般只切取头节、若干成熟节片和孕节制成封片标本。若准备作瓶装陈列标本，则应预先将虫体绕在一玻璃瓶上，再连瓶浸入盛有固定液的更大的瓶内固定之。在固定前应放于两玻片间夹平，压紧投入劳氏液或波氏液，也可用70%热酒精或10%～50%福尔马林液固定。幼虫固定前用手将头节挤出或在活体时用消化液孵出，洗净，压平后固定24h，然后依次移入30%、50%、70%酒精中，最后放于新的70%酒精中保存。 3、制片 固定、保存好的标本可用德氏苏木素染液或明矾洋红染液中染色。染色、脱水、透明、封片等方法与吸虫相同。 洋红染液配制：洋红4g，盐酸2ml，水15ml，85%酒精95ml。先将洋红溶解在盐酸与水中，煮沸后加 85%酒精 95ml，加热片刻，滴入按液数滴中和盐酸，过滤即成。 明矾洋红染液配制：2.5%氨明矾水溶液100ml，加洋红1g，煮沸20min，冷却后过滤即成。 三、线虫的采集、固定与制片 1、采集 线虫成虫多寄生于消化道、呼吸道、体腔及循环系统，幼虫多见于肌肉或各器官系统组织中。采集时用小镊子或解剖针挑取，肺部的线虫和丝虫目的线虫易破裂，应略加洗净后立即放入固定液中固定。 2、固定 线虫的固定可用70%酒精或3