微生物检验教学课件（扬州大学）第一节 炭疽杆菌检验.pptVIP

第一节 炭疽杆菌检验Bacillus anthracis 炭疽芽胞杆菌俗称炭疽杆菌，是一种人畜共患的病原体，在医学和兽医学上都相当重要。 致病性 可引起人畜共患的急性、热性、败血性传染病。 各种动物对本菌的易感性不一；通常： 绵羊、牛、鹿最易感——急性败血性死亡，尸僵不全、血凝不良、天然孔出血，臌气；剖检可见脾脏急剧肿胀，比平常大3~4倍，呈典型的败血脾； 马属、骆驼、猪、山羊次之——多为慢性局部感染，如咽部； 狗、猫及食肉动物抵抗力较大——多表现肠炭疽； 禽类通常无易感性； 人类感染则因侵入途径不同而出现皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽等。 人因误食或因工作接触，如屠宰、剖解、制革、皮毛等有关人员发生感染。 炭疽的病理特征为脾脏显著肿大，血液凝固不良。 一、形态特征 炭疽杆菌为G+杆菌，长而且粗大，长3.0~8.0 ?m，宽1.0~1.5 ?m；无鞭毛。 其形态在动物体内和体外有较大差异： 1）体内（即病料中，如血液、组织）形态： （1）单在或短链状(一般约2~5个)，似竹节状； （2）相连的菌端平截或微凹，游离端钝圆， 本菌属的其他细菌接头为钝圆，如蜡状芽胞杆菌； （3）形成荚膜 （4）活体内不形成芽胞。 2）体外（培养基上的培养物）形态： （1）长链状（几十或上百个）； （2）形成芽胞，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央或近中央，直径小于菌体； 炭疽芽胞杆菌吕弗勒多色亚甲基蓝染色。 炭疽芽胞杆菌的芽胞染成红紫色（多色亚甲基蓝，放大1000倍） 3）对炭疽杆菌的形态特征要注意几点： 猪慢性局部炭疽病料中菌体形态常不典型，呈细长弯曲或捻转的杆状； 病料腐败后，菌体分解，但荚膜抗腐败能力较强，荚膜仍可残留，称为“菌影” 。 二、培养特性 需氧； 最适生长：温度为37℃，pH7.2~7.6； 营养要求不高，普通培养基上生长良好。 普通琼脂： 强毒株菌落为粗糙型：扁平、灰白色、干燥、无光泽、不透明、边缘不整齐，用低倍镜或放大镜观察菌落的边缘呈卷发状（主要是长链组成）； 弱毒株或无毒株则多形成光滑型菌落； 5. 血琼脂：一般不溶血，个别菌株可轻微溶血；而该属其他成员则多有明显溶血； 在含有青霉素(0.5单位/ml)的培养基中，炭疽杆菌易形成原生质体而相互连接成串珠状，称为“串珠反应”（String of Pearls Reaction）；而该属其他细菌无此现象；可用于炭疽杆菌的诊断 三、生化特性 生化试验不是炭疽杆菌的主要鉴定项目。 葡萄糖 VP试验 还原硝酸盐 吲哚 H2S H2O2酶 ＋ ＋ ＋ － － ＋ 四、抵抗力 炭疽杆菌的繁殖体抵抗力不强； 但其芽胞体抵抗力非常强，对热、干燥等具有较强的抵抗力，不过芽胞对碘液及一些抗菌素（如青霉素、链霉素、磺胺等）比较敏感。 荚膜肿胀试验 取标本液或组织悬液滴于玻片上，加一滴抗炭疽血清，充分混匀，制成湿片，先用低倍镜找到典型的细菌后，再用高倍镜进一步检查，若找到周围肥厚不等、边界清晰的荚膜，即为阳性。 检验时必须注意： 病料镜检时一般有荚膜，如无荚膜则不要过早下结论，必须经分离培养后接种实验动物后再进行形态学检查。 对疑似炭疽杆菌病死亡的家畜严禁剖检，发现后必须首先采血镜检，确认无炭疽杆菌后方可进一步检查。 Ascoli氏沉淀反应 系Ascoli于1902年创立，是用加热抽提炭疽菌体多糖抗原与已知抗体进行的沉淀试验; 适用于各种病料、皮张、甚至严重腐败污染的尸体材料 * 肉汤：24小时，上清透明清朗，管底絮状沉淀，不形成菌膜和菌环； 明胶穿刺：呈漏斗状液化明胶，整个培养物形似倒立的松树状； 当青霉素加至10单位/ml，则炭疽杆菌生长受到抑制，不生长或微弱生长，而该属其他细菌一般不被抑制。 被检标本 新鲜脏器 镜检：荚膜染色、荚膜肿胀试验 小动物感染试验 血清学反应 分离培养 青霉素串珠试验 青霉素抑制试验 荚膜形成试验 动力检查 小动物感染试验 外界标本 兔血清肉汤增菌（37℃，4 h） 血清学反应 腐败脏器、皮毛：Ascoli反应 *