微生物检验教学课件（扬州大学）实验.docVIP

动物性食品微生物检验实验 实验一、食品检验中常用培养基的配制 一、实验目的和要求：掌握培养基的配制过程。认识培养基的组成特点。掌握高压灭菌的原理和操作方法 二、培养基的分类 培养基的定义：人工方法配合而成的专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养物制品。 培养基按形态分类：固体培养基、半固体培养基、液体培养基 培养基按功能分类： 基础培养基：营养要求相同的微生物，所需要的营养物质除少数几种不同外，其它大部分都是共同的。因此可以配成一种基础培养基，再按照某一种微生物的特殊需要，添加某种营养物即可。 增菌培养基：根据某种微生物的特殊营养要求，可配制出适合于这种微生物而不适合其他微生物生长的培养基。增菌培养基的选择性只是相对的，是纯化微生物过程的一个步骤。 选择性培养基：含有营养物（增菌剂）和抑菌剂（选择剂），通过抑菌剂的选择性抑制作用，使所要分离的微生物得到较好的繁殖，而其他菌被抑制。抑菌剂的种类很多，如孔雀绿、煌绿、亚硒酸钠、硝酸盐、胆盐等。 鉴别培养基：主要加入指示剂，如伊红、美兰。伊红是酸性染料，美兰是碱性染料。 一般鉴别培养基 选择性鉴别培养基：如亚硫酸铋琼脂中的亚硫酸铋和煌绿，既是抑菌剂，又是指示剂。生化反应鉴别培养基 厌氧菌培养基 三、培养基配制的一般过程 1.认识该培养基的配方和组成特点。2.按照所须配制的量，进行计算称量。3.先用大约3/4体积的水溶解。必要时，可加热促进成分的溶解。4.用碱或酸调节pH值至所须的酸碱度，补足剩余水分。5.根据需要与否，加入琼脂粉（条），煮沸直至完全溶解，并补足所挥发水分。6.分装至试管或盐水瓶等，包扎待灭菌。 四、本次实验中须配制的培养基 1、计数琼脂：用于细菌总数的测定 成分：蛋白胨 10 g； 牛肉粉 3 g ； 氯化钠 5 g； 蒸馏水 1000 ml；琼脂粉 15 g 制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内。按正pH至7.2(7.4。加入琼脂，加热煮沸。使琼脂溶化。分装，高压灭菌121 ℃，15 min。 附注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面，如用于菌落计数，琼脂量为1.5 %，如作成平板或斜面，则应为1.8 %。 2、乳糖胆盐发酵管：用于大肠菌群的测定 成分：蛋白胨 20 g；胆盐 5 g ； 乳糖 10 g 蒸馏水 1000 ml；0.04%溴甲酚紫水溶液 25 ml；pH 7.4 制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115 ℃，15 min。 附注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。 3、麦康凯琼脂：可用于肠杆菌菌科的鉴别培养 成分：麦康凯 51 g ；氯化钠 5 g； 蒸馏水 1000 ml； 0.5%中性红水溶液 5 ml；0.01%结晶紫水溶液 10 ml；琼脂 17 g 制法：（1）将麦康凯、氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，校正pH至7.2；将琼脂加入于600ml蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，高压灭菌121℃15min备用。（2）临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖。冷至50(55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀倾注平板。 附注：结晶紫有中性红溶液配好后须经高压灭菌。可用于肠杆菌菌科的鉴别培养 4、马铃薯琼脂：用于霉菌的分离和培养（PDA） 成分：马铃薯（去皮切碎） 300 g；葡萄糖 20 g；琼脂 20 g；蒸馏水 1000 ml 制法：将马铃薯去皮切碎，加蒸馏水至1000 ml，煮沸10(20 min，用纱布过滤，补加蒸馏水至1000 ml，然后加葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌121 ℃，15 min。 用途：分离培养霉菌。 实验二 细菌总数的测定 一、目的和要求：学习并掌握环境和食品中细菌总数测定的方法。 二、实验说明 细菌总数：指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1 g或1 ml检样中所含细菌菌落的总数。主要作为食品被污染程度的标志。 菌落总数的测定，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。 三、实验材料：土壤；水源；过期变质的牛奶；市场上销售的变质食品 四、实验步骤 1.以无菌操作，将检样25 g（25 ml）剪碎放于含有225 ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨作成1∶10的均匀稀释液。 2.用1.0 ml灭菌吸管吸取1∶10稀释的稀释液1 ml，注入含有9.0 ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要