生物分离工程工艺原理6.ppt

生物物质分离工程Separation engineering of Biotechnology 刘树中 E-mail: Liushuzhong@ 第七章 双水相萃取技术 萃取是最常用的一种液液分离方法，但是普通的有机溶剂萃取法由于以下原因难于应用于蛋白质分离（1）许多蛋白质都有极强的亲水性，不溶于有机溶剂；（2）蛋白质在有机溶剂相中易变性失活。 第一节 双水相分离理论 一、双水相的形成 当两种聚合物溶液互相混合时，究竟是否分层或混合成一相，决定于两种因素： 一为体系熵的增加；另一为分子间作用力。两种物质混合时熵的增加与涉及的分子数目有关。因而，如以摩尔计算，则小分子间与大分子间的混合，熵的增加是相同的。但分子间的作用力，可看作分子中各基团间相互作用力之和，分子越大，当然作用力也越大。因此，对大分子而言，如以摩尔为单位，则分子间的作用力与分子间的混合熵相比占主要地位，因而主要由前者决定混合的结果。 （1）两种聚合物分子间如有斥力存在，即某种分子希望在它周围的分子系同种分子而非异种分子，则在达到平衡后，就有可能分成两相，两种聚合物分别进入到一相中。当两种聚合物混合时，这种现象最常见，称称为聚合物的不相溶性。 （2）如果两种聚合物间存在引力，而且引力很强，如在带相反电荷的两种聚电解质之间，则它们相互结合而存在于一共同的相中。 （3）如果两种聚合物间不存在较强的斥力或引力，则两者能相互混合。 （4）聚合物与盐类溶液也能形成两相，这是由于盐析作用。 典型的双水相系统见表7-1。 在生化工程中，得到应用的仅限于聚乙二醇-葡聚糖和聚乙二醇-无机盐系统。 二、相图 双水相形成的条件和定量关系可用相图来表示，对于由两种聚合物和水组成的系统，其相图如下图所示。 实验证明，水溶液两相系统的形成与所用多聚物的配比有密切的关系。 所形成的双水相的相图为双曲线，如果多聚物和的配比取自双曲线的右侧，配制成的混合液就能形成两相，这个区域就称为两相区；如果配比取自于双曲线的左侧，则混合液不能形成两相，这个区域就称为互溶区（均匀区）。图中的曲线把两相区和互溶区分隔开来，称为双节线。 图中，以配比QA，PA进行配制两相， 上相的组成为C（QC%，PC%），下相的组成为B（QB%，PB%），B、C均落在双节线上，称为节点，B、C连线BC称为系线。在同一条系线上的各点分成的两相，具有相同的组成。，但体积比不同。令VC、VB分别代表上相和下相的体积，则有： VC BA（B点到A点之间的距离） —— ＝————————————— （1） VB AC（A点到C点之间的距离） 即服从于杠杆规则。 证明：令WC，WB，WA分别代表上相、下相和系统的总重量，则按物料衡算有： WC＋WB＝WA （2） WC·PC＋WB·PB＝WA·PA （3） 将式（2）带入式（3）中，并移项得 WC（PC－PA）＝WB（PA－PB） （4） ∴ WC/ WB＝ （PB－PA）/ （ PA－PC） ＝BA/AC （5） 设dC，dB分别为上相和下相的密度，则有： VC·dC BA ———＝ —— （6） VB·dB AC 但聚合物溶液的密度通常和水相差不大（一般在1.0-1.1之间），于是可得式（1）。 当系线向下移动时长度逐渐减小，这说明两相的差别减小，当达到K点时，系线的长度为零，两相间差别消失，按它配制成的溶液则不能形成两相。而在无限趋向它的两相区配制溶液，所形成的上下两相不但体积相等，而且两相中多聚物配比也相同，具有这种性质的唯一节点被称为临界点。 三、分配理论 1.表面自由能的影响 和溶剂萃取法一样，蛋白质在双水相间的分配，由分配系数： K＝C1/C2 来描述。习惯上C1上相中的浓度， C2下相中的浓度。当系统固定时，分配系数为一常数，与蛋白质的浓度无关。 利用双水相系统分离大分子物质是很合适的。