流式细胞仪现今临床应用与美国上法规指引-财团法人医药品查验中心.PDF

流式細胞儀現今臨床應用與美國上市法規指引 范文佳1 前言 流式細胞儀推出至今已超過了四十年，伴隨著單株抗體的發展，流式細胞儀被廣泛 的使用於基礎科學研究與臨床診斷各方面。其應用包括了細胞生物學的細胞週期、凋亡 分析;臨床腫瘤的判斷、預後與治療；免疫細胞的分型、免疫疾病的病程進展；血液疾 病的診斷與分型…等等。儀器更從早期的4色、 6色分析，至今可以同步分析 18種螢光 染色，因此，不論待測物是以磁珠(beads)或是細胞 (cells)為基底，皆可依分析項目而輕 易分類。 流式細胞儀的架構，主要由三個系統所構成: 流體、光學、電子系統圖一、左( ) 。 由流體系統運送顆粒，光學系統依顆粒的形態與所攜帶的螢光而激發出不同的光訊號， 再由電子系統將光的訊號轉變為電訊號，然後透過電腦的處理來區分不同特質的細胞。 舉例來說，如果分析物是細胞，當細胞跟隨著液體的流動，一個一個依序的通過量測區 時，細胞會受到不同波長的雷射光照射。此時可以依光的前散射 (forward scatter, FSC)與 側散射 (side scatter, SSC)情形了解細胞的物理特質；如果細胞上的某些特殊抗原被標定 螢光物質的抗體結合，則螢光物質會被雷射光激發而產生螢光。因此，流式細胞儀可藉 由細胞的物理特質與細胞表面抗原的表現將細胞表現型 (phenotype)分類圖一、右( ) 。 圖一、流式細胞儀主要架構與細胞分型 1 財團法人醫藥品查驗中 心醫療器材 組 RegMed 2015 Vol. 56 10 流式細胞儀現今的臨床應用 流式細胞儀在臨床常規檢測中使用的種類越來越多，常用於診斷、預測與監視病情 [9] 。現將臨床使用情形簡述如下: 一、白血病(Leukaemia)與淋巴瘤(lymphoma)的分析 流式細胞儀是一個很重要的免疫分型(immunophenotyping)工具，常用於鑑別診斷血 液腫瘤(hematological neoplasm)的種類與疾病發展的狀況。 正常位於骨髓的造血幹細胞會漸進式的分化成為血球，並釋放至週邊血液。造血幹 細胞會依不同的成熟路徑成為各種細胞世系(如骨髓系或淋巴系: ) 。在每一個分化階段， 細胞會帶有不同的標誌(markers) ，也就是分化群(Cluster of differentiation, CD) 。細胞發 展的任一階段都有可能產生腫瘤細胞，可利用腫瘤細胞的表面所缺乏的某些標誌或表現 某些異常的蛋白質，選用一組抗體結合 3-4色螢光做初步判別，而後再針對初步判別的 結果做更專一性的延伸。 正常血液細胞的主要標記如下: B 細胞: CD5, CD10, CD19, CD20, CD45, Kappa, Lambda; T 細胞: CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD45; NK細胞: CD16, CD56; 骨髓性細胞: CD11b, CD13, CD14, CD15, CD33, CD45, CD117; 漿細胞 : CD19, CD38, CD45, CD138 舉例來說，CD45會出現於所有的白血球，由 CD45結合 SSC(代表細胞顆粒性的判) 讀，可以將主要的白血球分型。如果再搭配細胞特有的標誌，就可以清楚的標定出 B細 胞、T 細胞…等等。流式細胞儀檢測也可用以了解白血病治療後疾病緩解的情形，以及 病患化療後注入捐贈者的造血幹細胞，幹細胞移動與生長的情形幹細胞( CD34+) 二、器官移植-交叉配對詴驗 (cross match) [10] 流式細胞儀交叉配對法(flow cytometric cross-matching)是目前最敏感的方法 ，在 器官移植前將受贈者的血清與捐贈者的細胞一起培育後