紫外照射对大肠埃希氏菌质粒DNA影响的研究.pdf

青海民族大学学报(教育科学版) JoURNALoFQINGHAINATIoNALITIESUNIVERSITY (EducationScienceEdition) 2010年第 5 N05．2010 文章编号：1674—9235(2010)05—0048—04 紫外照射对大肠埃希氏菌质粒DNA影响的研究 谢 晖 (陕西师范大学 生命科学学院，陕西 西安710062) 摘 要：本研究对大肠杆菌进行紫外照射诱变后，获得了通过其内部的SOS修复系统产生的突变菌株，采用异丙醇沉淀 法对各组菌种进行质粒DNA提取．通过测定各组OD值，经过比较与分析得出了经紫外处理 10min后的大肠杆菌质粒DNA浓 度最高，为215ug／ml，其次为正常组的190ug／m1．经紫外照射30rain后的大肠杆菌质粒 DNA浓度最低，仅为65ug／m1．紫外处 理时间与质粒DNA浓度整体呈现下降趋势．初步推测是由于大肠杆菌 SOS修复系统的RecA蛋白促进了不完全同源的DNA 序列之间的重组，产生大量的错配碱基，从而引起突变，进而影响到其质粒DNA的浓度． 关键词：质粒DNA；SOS修复系统；紫外诱变；异丙醇沉淀法 中图分类号：0655 文献标识码：B 1 前言 质粒(Plasmid)是一种染色体外稳定的遗传因子．大小从 1kb到200kb不等，为双链 、闭环的DNA分子 并以超螺旋状态存在于宿主细胞中．质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中．它具有 自主复制和转录能 力．能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息，它可将有用的外源基因通过基因工程的 手段送入细胞中进行繁殖和表达，是分子生物学试验中常用的工具．质粒DNA这种基因运载工具在分子生 物学中有着极为广泛的应用前景．而质粒DNA的分离提取是分子生物学试验中经常使用的最基本的工作． 质粒 DNA的提取效率和纯度直接影响到分子生物学试验 的成功与否：如酶切、连接、大肠杆菌的转化、PCR 扩增等 ． 紫外线(uhravioletlight，uV)能使DNA产生很多光生成物．有两种不同的光生成物，一种发生在相邻的 两个嘧啶之间——环丁烷嘧啶光二聚体，另一种是6—4光生成物 ][引．其中，胸腺嘧啶二聚体是重要的一种 损伤．紫外线还能引起缺失、重复和移码突变．有多项研究表明，这些突变可能是紫外线的直接作用、间接作 用和SOS系统共同作用的结果_4儿 ． 随着分子生物学研究的逐渐普及 ，大肠杆菌质粒提取 已成为许多分子生物学实验室的基本手段之一．近 年来 ，研究人员也陆续报道了各种质 射突变对大肠杆菌质粒 DNA影响的五 用快速简便效率较高的异丙醇提取 菌质粒DNA提取浓度与纯度的初步 系统联合突变后的DNA提取效率，以 学的质粒提取方法的选取上提供较优 2 材料与方法 收稿 日期：2010—05—06 作者简介：谢 晖(1986一)，男 ，陕西西安人 · 48 · 谢 晖：紫外照射对大肠埃希氏菌质粒DNA影响的研究 2．1 实验仪器 电泳凝胶定量分析系统(UOV／white2020D)；水平电泳系统 (5000V、200MaDYY一11112)；高速冷冻离心 机(上海安亭科学仪器厂TGL一16G)；核酸定量仪 eppendorf)；1．5ml离心管． 2．2 主要试剂及材料 琼脂糖(宝生物工程大连有限公司)、葡萄糖、EDTA，TritonX一100、苯酚、TrisHC1(上海生工生物工程技 术服务有限公司)、异丙醇、SDS(青岛海泰生物技术有限公司)、乙酸钠、冰醋酸、无水乙醇 (天津 巴斯夫化工 有限公司)，大肠杆菌工程菌株DH5ot(携带P3质粒)． 2．3 小量制备质粒DNA的溶液配制 溶液 I：称取 4．504g葡萄糖，量取 以下溶液 12．5ml1mol／LTris·HC1(pH8．0)、10ml0．5mol／LEDTA (pH8．0)放人500ml烧杯中，加 30Oral去离子水溶解 ，再用去离子水定容至500ml，125~C高压灭菌20min，储