组织常规HE染色.pptVIP

* 形态学基本技术袁广明实验教学中心形态学实验室 组织取材 取材:指从待检标本中按病理检查的目的,要求,在适当部位切取一定大小和数量的组织快的方法. 要求 1.材料要新鲜; 2.保持组织的原有状态,避免变形; 3.正确选择所需部位; 4.组织快的大小一般为1.0cm×1.5cm×0.2cm; 5.避免各种穿刺标本,内镜钳取物等活检小组织丢失. 组织固定 固定的目的：保持细胞与生活时的形态相似，防止自溶与腐败。 常用固定剂 一.甲醛（HCHO），饱和量为40%，配制百分浓度时将饱和量视为100%， 作用原理：甲醛通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用。 常用10%甲醛水溶液固定：10份甲醛加90份蒸溜水。 二.乙酸，乙醇，Ｂouin,多聚甲醛，Zenker等． 注意： （1）组织用甲醛溶液固定时间较长，应用流水冲洗，以除去甲醛和 中和酸化的甲醛。 (2)组织块不宜太大，以厚度为2mm,长宽为10mm×10mm为宜。 （3）固定液以组织块大小的30倍为宜，最好在固定组织的瓶底垫 上几层纱布以使组织充分固定。 （4）10%福尔马林可作保存液。 组织脱水 脱水的目的:利用某些能与水相混合的化学试剂泡浸组织，把组织内水分逐步置换出来。 常用的脱水液:乙醇 用乙醇脱水要由低浓度逐级上行至高浓度（一般70～100%的浓度），逐步置换组织内的水份，最后组织内部水分被高浓度乙醇所取代。组织在乙醇脱水时，低浓度乙醇（95%以下）的时间可适当延长，高浓度乙醇（100%）脱水时间不能过长。 组织透明 原理：透明剂具有与酒精和石蜡相混合的性质，当二甲苯渗入组织后，酒精即被置换，这时组织内出现一种透明状态，亦称透明。 注意： (1).透明不彻底，石蜡难渗入组织，透明过 度则组织易使组织收缩和变脆。 （2）.二甲苯必须保持无水。 （3）. 二甲苯透明的时间不宜过长。 其它透明液：甲苯，苯，仿 ，香柏油，冬青油 浸蜡 浸蜡原理：石蜡浸入组织，起到充分支持作用，并使组织内部硬度均匀，以助切出完整的切片。 浸蜡的时间:（1）.组织1—2mm,透2—3小时；2—3mm,透3—5小时； （2）．细胞体小，密集，纤维成分小，如肝，脾，骨髓应减小时间。 （3）．含脂肪和纤维成分较多的组织需增加时间。 组织包埋 包埋:将蜡液注入包埋模具中,迅速将组织块平放如蜡液内,摆正并放平,然后移至冷却台,使组织块同蜡液凝固在一起的过程． 包埋时把组织最大最平切面或所需的病灶切面向 下。 组织处理的时间 组织处理的参考时间（自动脱水仪） 实验组织：小鼠肝,脾,肺,心,大脑，胃，肠等 固定剂： 10%Hcho 固定时间：24小时。 脱水步骤 步骤 试剂 时间（小时） 1. 75%ALC 0:20 2. 90%ALC 0:20 3. 95%ALC 0:20 4. 100%ALC 0:20 5. 100%ALC 0:20 6. 100%ALC 0:20 7. XYL 0;05 8. XYL 0:05 9. XYL 0:10 10. WAX 0:20 11. WAX 0:20 12. WAX 0:20 石蜡切片 切片完整、贴片 恰当 切片较薄和均匀 无皱折 无刀痕 贴片烤片 切出的蜡片置恒温水中，水温约为39～42℃ 贴片时要注意贴在载玻片中间稍偏右的位置上 贴好片后放入约45～55℃的烤箱内。 苏木精——伊红染色原理 Harris苏木素的配制 苏木素（Hematoxylin）C18H14O6 （1）液 苏木素 1克 纯酒精 10毫升 （2）液 硫酸铝钾 20克 蒸馏水 200毫升 氧化汞 0。6克 冰醋酸 8毫升 A. 将（1）用玻棒搅拌使苏木精溶解。 B. 再将（2）加温溶解（70℃—80℃不必沸腾