噬菌体展示筛选与狂犬病毒P互作的宿主蛋白.PDFVIP

第10卷第15 期 Vol.10 No.15 2017 年 8 月 August 2017 噬菌体展示筛选与狂犬病毒 P 互作的宿主蛋白 董婉玉，李有文，傅振芳，彭贵青* （华中农业大学动物医学院，农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070 ） 摘要：首先表达纯化了狂犬病毒（rabies virus ，RABV ）P 蛋白，以纯化的P 蛋白为靶蛋白，通过T7 噬菌体展 示的方法筛选相互作用蛋白。通过5 轮的筛选，得到多个阳性克隆，其中核糖体大亚基蛋白L9 （ribosomal protein L9 ，RPL9 ）与P 蛋白特异性相互作用，并通过酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immuno sorbent assay ，ELISA ）、 GST pull-down 得到验证，为进一步阐明RABV 的复制和致病机理奠定基础。 关键词：家畜病毒学；狂犬病毒；P 蛋白；噬菌体展示技术；相互作用 中图分类号：S855 文献标识码：A 文章编号：1674-2850(2017)15-1722-07 Screening of the host proteins interacting with rabies virus P by phage display system DONG Wanyu, LI Youwen, FU Zhenfang, PENG Guiqing (State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University , Wuhan 430070, China) Abstract: The study firstly expressed and purified the rabies virus (RABV) P protein, and we used the purified P protein as the target to screen the interaction protein by a T7 phage display system. Through 5 rounds of elutriation, we obtained several positive clones. The results showed that ribosomal protein L9 (RPL9) could interacted with P protein specifically, which was demonstrated by enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA) and GST pull-down. The study laid the foundation to clarify the replication and pathogenesis of RABV further. Key words: livestock virology; rabies virus; P protein; phage display technology; interaction 0 引言 狂犬病又称恐水症，是由RABV 所致的自然疫源性人畜共患神经系统急性传染病，可以感染人和所 [1] [2～3] 有温血动物，每年导致约60 000 人死亡 。狂犬病的分布呈全球性 ，几乎所有国家和地区均有狂犬 病疫情，除南极洲外的地方都有狂犬病例报告，其中绝大多数病例集中于亚、非、拉[4～6] 。我国近年来