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诊断学教研室 掌握：自动化免疫比浊分析原理及类型，化学发 光自动化免疫分析原理及类型，荧光免疫 自动化分析原理及类型，各类型分析特点。 熟悉：分析试剂中不同标记物的作用原理及类型， 抗原过量检测设计原理。 了解：自动化分析的发展历史、基本原理、临床 应用范围。 第二节 化学发光自动免疫分析 三、化学发光分析中的类型 （二）化学发光酶免疫分析（CLEIA） —反应中使用辣根过氧酶（HRP）标记Ag和Ab，在反应终点 再加入鲁米诺-过氧化氢，产生发光反应。测定发光强度信号可分析被测物的含量。 第二节 化学发光自动免疫分析 三、化学发光分析中的类型 （三） 微粒子化学发光免疫分析（ELIA） —以顺磁性微粒作为固相载体包被抗体，当加入标本形成第一 次抗原抗体反应后, 由于磁力的作用，很快与非特异性物质分开, 再加入碱性磷酸 酶（ALP）标记的第二抗体，形成磁珠包被抗 原-抗体-酶标记复合物，洗去未结合的抗体，加入ALP的发光低 物AMPPD，在ALP的催化下迅速脱去磷酸基团，生成不稳定的 中间体AMPD，中间体分解过程—即由激发态回到基态时，可以 产生稳定的持续发光反应。发射光所释放的光量子被光量子阅读 器记录，经计算机处理系统将其转换为待测物的浓度。 该法重复性好，检测水平可达 pg/ml。 第二节 化学发光自动免疫分析 三、化学发光分析中的类型 （三） 微粒子化学发光免疫分析（ELIA） 第二节 化学发光自动免疫分析 三、化学发光分析中的类型 （四） 电化学化学发光免疫分析（ECLIA） —反应包括化学发光和电化学 两个过程： 生物素抗体-抗原-三联吡 啶钌标记抗体-亲和素微粒 生物素- -亲和素微粒 双抗体夹心复合物 第一步 亲和素- 顺磁性 微粒 第二节 化学发光自动免疫分析 三、化学发光分析中的类型 （四） 电化学化学发光免疫分析（ECLIA） 第二步 强还原剂 强氧化剂 第二节 化学发光自动免疫分析 四、在临床免疫检测中的应用 计算机技术 自动化 分析仪器 免疫反应 发光技术 智能化程度高 敏感度高 特异性好 灵活、快速 易于质量管理 检测项目： 内分泌激素类、 肿瘤标志物类、 心机标志物类、 病毒标志物类、 治疗药物浓度、 骨代谢、贫血类 + 第三节 荧光免疫自动化分析 免疫荧光技术原理 荧光物质标 记已知的抗 体或抗原 结合 抗原-抗体 复合物 荧光信号检测器 计算机处理 打印报告 —荧光是由荧光物质吸收 光能，而后释放能量，并发 出一种较长波长的光。 —当一束光投射到荧光物质上，其电子被激发到较高的能量水平。而后被激发的物质释放出光子而回到初始状态。在这个过程中丢失一部分能量，而释放的光子比激发光的波长更长。先后两者波长之差是荧光物质的特征，称为“Stokes”改变。 第三节 荧光免疫自动化分析 一、时间分辨荧光免疫测定 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是在免疫荧光分析的基础上，即以抗原-抗体反应与荧光物质的发光和时间分辨技术结合，发展起来的一种新型的分析技术。 时间分辨采用镧系稀土元素铕（Eu3+）、钐（Sm3+）等鳌合物被激活后产生的特异荧光寿命比普通荧光长3~4个数量级，待短寿命的非特异性荧光衰退后再测定长寿命的荧光信号。 优点：由于排除了非特异性荧光的干扰，因此最大限度地提高了测定方法的敏感度，最小检出值达10-16mol/L、分析速度快、有效使用期长、无放射性污染、应用范围广等。 第三节 荧光免疫自动化分析 一、时间分辨荧光免疫测定 （一）TRFIA分析原理 排除非特异性荧光（即本底荧光） 普通荧光素 血清蛋白发射荧光波长 一般为1~10ns 荧光寿命短 胆红素—发射荧光波长 最长不超过20ns 短激发波长280 nm， 发射波长320~350nm 短激发波长280 nm， 发射波长320~350nm 镧系元素铕等鳌合物是具有三价离子的“特殊荧光基团” 1－（对苯偶氮）－EDTA 异硫氰酸苯基 －EDTA 异硫氰