热带作物木莲中生物碱含量测定.doc

热带作物木莲中生物碱含量测定 　　【摘 要】生物碱类化合物大多数具有生理活性，往往是许多中草药及药用植物的有效成分。本文以氯仿为溶剂，索氏法提取木莲枝和叶中的生物碱。溴甲酚绿为显色剂，在pH=5.4条件下，采用紫外分光光度法测定其含量。本方法操作简单，结果准确、可靠，重现性好，研究结果为木莲的开发利用提供了科学依据。 【关键词】木莲；生物碱；含量测定 一、前言 生物碱类化合物大多数具有生理活性，往往是许多中草药及药用植物的有效成分。生物碱作为有效成分之一，其含量的高低直接与药材的质量和疗效有关。制定科学合理的提取工艺，保证有效成分生物碱的提取效率，从而有效地控制中药材质量，保证药效是非常重要的。[1] 木莲（Manglietia hainanensis Dandy）为木兰科木莲属植物，在我们海南，木莲被称为龙楠树、绿楠、绿兰等，主要分布于海南定安、保亭、乐东、琼中、陵水、三亚、东方等市县，生于海拔300――1200m的溪边、密林中，是海南特产植物[2，3]，属国家三级植物保护种；文献[4]曾报道过对海南木莲的TLC鉴定研究。木莲属植物民间药用较多，为进一步拓展本属药用植物种类，我们对海南木莲枝和叶中的生物碱含量进行了测定。 从目前的研究来看，对木莲中的生物碱含量测定未曾见有文献报道。对于测定生物碱的含量来说，测定方法有紫外分光光度法，两相滴定法[5]、非水滴定法[6]、HPLC-UV[7]、HPLC-ELSD[8]，GC[9]等。中药材中生物碱提取方法常用的有冷浸取、回流提取、索氏提取和超声波震荡提取等。本实验采用紫外分光光法，测定方法较为普遍，操作简单，准确灵敏的，而生物碱的提取，一般采用索氏提取，因为用索氏提取效果比较好，而且溶液澄清，不需要进行抽滤。 首先进行的是氯仿通过索氏提取将木莲中的生物碱进行提取，配制标准对照品，显色剂和缓冲溶液，测定最大吸收波长，绘制标准曲线，然后对海南木莲中的生物碱进行紫外分光光度测定。为了对该方法的准确度进行研究，还进行了加标回收率和稳定性实验，通过这一部分的实验，可以确定，使用紫外分光光度法测定海南木莲中的生物碱，是准确可靠的。 二、实验部分 （一）仪器、材料与试剂 （1）仪器 PHS-3C型酸度计（上海大普仪器有限公司）；T6紫外可见分光光度计（北京普析仪器厂）； UV757型紫外可见分光光度计（上海分析仪器厂）；FA1604电子天平（上海精科天平）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；D2F-200 型真空干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）；微型植物粉碎机和索氏提取器自制。 （2）材料 海南木莲枝和叶于2009年2月采集于海南省乐东县尖峰岭，自然晾干，粉碎备用。 （3）试剂 盐酸小檗碱（中国药品生物制品检定所，纯度99.99%），溴甲酚绿（上海试剂三厂），邻苯二甲酸氢钾（广州化学试剂厂），柠檬酸（天津市大茂化学试剂厂），柠檬酸钠（广州化学试剂厂），氯仿（天津市富宇精细化工有限公司），浓氨水（广州市番禺力强化工厂），氢氧化钠（天津市百世化工有限公司）等，所用试剂均为国产分析纯。所用水为蒸馏水。 （二）试验方法 （1）缓冲溶液及显色剂的配制 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液：准确称量10.507g 柠檬酸，用蒸馏水溶解于500mL的容量瓶中并定容至刻度，得浓度为0.1mol/L的溶液。准确称量14.705g柠檬酸钠，用蒸馏水溶解于500mL的容量瓶中并定溶至刻度，得浓度为0.1mol/L的溶液，备用。分别取16 mL 0.1mol/L的柠檬酸溶液和34mL 0.1mol/L的柠檬酸钠溶液放置于100mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，得pH为5.4的缓冲溶液。 参照文献[10]配制溴甲酚绿指示液：精密称取溴甲酚绿0.125g，用0. 1 mol/L的 NaOH 25. 00 mL溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2.55 g，用少量蒸馏水溶解后，转移至250 mL的容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀备用。 （2）标准品溶液的配制 在电子天平上精密称取盐酸小檗碱10.0mg放入小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，转移到50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，得到浓度为200μg/mL的标准溶液。 （3）标准曲线的绘制 精密量取浓度为200μg/mL盐酸小檗碱标准溶液0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9mL于分液漏斗中，分别标上序号1，2，3，4，5，6。各加水至1.0 mL，用吸量管加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液5.0mL，再依次精密加入溴甲酚绿指示液2.0 mL，氯仿10.0 mL，充分振摇1 min，放置分层，静置1h，取氯仿层备用。 另精密量取