淇河鲫穿孔素基因的克隆与表达研究Cloning and expression of Qihe crucian carp perforin gene.pdfVIP

J11 o 1 ● · · ^ ^ · and ot t210nlngexpressionanalysispertorin ^一 · ●，、·一 ● ot Carassiusauratusin river gene Uihe ADissertation Submittedto theGraduateSchoolofHenan Normal University inPartialFulfillmentofthe Requirements forthe of Degree MasterofScience By chao Caoyan L Nut ：roslvreoubL‘L 1 L1‘ May,2014 摘要 穿孔素(poreforming lymphocyte， killer CTL)和自然杀伤细胞(naturalcell，NK)分泌的一种具有很强溶胞活性的细胞毒 蛋白，PFP不仅是一种重要的免疫效应分子，还是一种免疫调节分子。由PFP介导的细 auratusin Qihe 了淇河鲫的PFP基因在不同组织中以及早期发育阶段基因的表达，使用Q．PCR技术对 淇河鲫在诱导剂诱导和病原胁迫下PFP基因的表达进行了分析。 使用简并引物扩增获得淇河鲫的两个PFP基因的中间片段，使用RACE法扩增得 到PFP基因cDNA全长。淇河鲫PFP．1基因eDNA全长为21517一非翻译 bp，其中，5 区(UTR)119 346 bp和3’UTRbp，ORF为1686bp，编码561个氨基酸。PFP．1蛋白 的分子量约为63．304 bp， 5，_UTR177 196 bp和3’UTRbp，ORF为1674bp，编码557个氨基酸。PFP．2蛋白的 分子量约为60．997 有跨膜螺旋。 中以及早期发育阶段均有表达，且在不同组织中，基因的表达量具有一定的差异性。 PFP．1基因在肌肉中的表达量最高，而在心脏和卵巢中的表达量最低；PFP．2基因在鳃 中的表达量最高，而在卵巢中的表达量最低。 的表达量从成熟的卵细胞开始到处于心跳期的受精卵，呈先降后升的趋势，在初孵仔鱼 出现短暂回落之后又持续上调并稳定表达；从成熟的卵细胞、处于细胞分裂期的受精卵 至胚孔封闭期，PFP．1基因的表达量持续下调并达到最低，与成熟的卵细胞相比，PFP．1 基因的表达量下降约46倍，之后又呈现稳步上调的趋势；PFP．2基因的表达量从成熟的