转基按蚊影响疟原虫的传播(中文PPT).pptx

Transgenic anopheline mosquitoes(按蚊)impaired in transmission of amalaria parasite（疟原虫）;研究背景;研究背景 ;研究方法;1转化载体;2种系转化斯氏按蚊种系转化和变异一样很早就被描述了。简单地说，胚胎用0.2mM p-nitro phenyl p’-guanidinobenzoate (Sigma)处理，然后用石英针微注射拉到一个P-2000拉单晶机上。(Briefly, embryos were treated with 0.2mM p-nitro phenyl p’-guanidinobenzoate (Sigma) and microinjected with quartz needles pulled on a P-2000 puller (Sutter).?)构建的pBacAgCP[SM1]4 (0.5 mg ml-1)与helper phsp-pBac (0.3 mg ml-1)混合。对于每一个最基本属，1~4个成虫蚊子源于注射的胚胎(G0)，并且与5–10个野生种蚊子异性交配。在下一代(G1)，转基因蚊子通过寻找幼虫的绿色荧光蛋白进行筛选(Fig. 1b)。在每一代，蚊子的繁殖通过未处理的非转基因雌蚊（源自被用来创建转基因品系的种群）与转基因雄蚊交配。这就确保了所有转基因品系???遗传背景与野生对照组蚊子相同。;结果与讨论;Northern blot 分析表明，AgCP[SM1]4 转基因是迅速和强烈的被转基因蚊子中肠血粉诱导，在3~6 h达顶峰（图1 d），这一模式符合预先观察：基因被冈比亚按蚊（Anopheles gambiae）羧肽酶启动子驱动。我们调查了中肠上皮AgCP[SM1]4综合体，使用免疫荧光显微观察。这种重组蛋白在饲喂血粉6h和24h的蚊子中肠上皮中被检测到，但到了36h，这一信号已经减弱到接近基础水平。因为动合子在大约饲喂血粉24h后侵入中肠上皮，重组多肽的合成与分泌先于寄生虫的侵染是很重要的。;1c、 Southern blot分析的基因组DNA提取自来自两个A和两个B的转基因蚊子品系，用Not I and Bgl II 酶消化。探针是[SM1]4和3xP3-EGFP-SV40混合体。;;b、 AgCP[SM1]4转基因蚊子通过转化标记介导的荧光检测。上图，野生种幼虫（中间的）被上面和底部的转基因幼虫包在中间。在底部的图片中，腹部神经索有绿色荧光，与标记的介导荧光一样。下图，野生种（左）头部和转基因蚊子（右）。整个眼部表达GFP但面部荧光依赖入射光角度。;结果讨论;结果与讨论;结果与讨论;结果与讨论;结果与讨论