鱼油、海狗油、鳕鱼肝油中EPA、DHA、DPA含量检测方法.docVIP

依据：GB/T 17377-1998。 范围 本标准给出了采用填充柱或毛细管柱气相色谱法定性、定量测定依据GB/T 17376规定的方法获得的脂肪酸甲酯混合物组成的一般性指南。 本标准不适用于聚合的脂肪酸。 1. 试剂 1.1 载气：惰性气体（氮、氦、氩、氢等），干燥且氧气含量低于10mg/kg。 注：只有在采用毛细管柱进行分析时，作为载气的氢气能使分析速度加快一倍，但有危险，应配用安全装置。 1.2 助燃气 1.2.1 氢气（纯度99.9％），不含有机杂质 。 1.2.2空气或氧气，不含有机杂质。 1.3参比标准 纯脂肪酸甲酯的混合物或已知油脂组成的甲酯，其组成最好与欲分析之脂肪物质相似。 应注意防止多不饱和脂肪酸氧化。 2. 仪器 本标准涉及到气相色谱法常用的设备,使用填充柱或毛细管柱及火焰离子化检测器。任何符合附录A中规定的效率和分离度的设备均适用。 2.1 气相色谱仪； 2.2 注射器 注射器最大容量应为10μl，刻度应为0.1μl； 2.3 记录器 如果由记录曲线计算被分析混合物的组分，则需要一台高精度、能与所用仪器相匹配的电子记录器。记录器应具有如下性能： 响应速率小于1.5s，最好小于1s（响应速率是当瞬间输入100％信号时，记录笔从0％移动至90％所需的时间）。 记录纸宽：至少25cm。 记录纸速：在0.4～2.5cm/min之间可调。 2.4 积分仪或计算器（任选） 可用电子积分仪或电子计算器进行快速、准确的计算。它应有灵敏度足够的线性响应，对基线偏移也应能作出令人满意的校正。 3. 操作步骤 3.1～3.3叙述的操作步骤与使用火焰离子化检测器有关。 作为替代，亦可使用热导检测器（根据热导变化的工作原理）进行气相色谱仪分析。但要按第7章中所述修改操作条件。 3.1 试验条件：选择最佳操作条件。 3.1.1 填充性 在选择试验条件下，应考虑下列各因素： a）柱的长度和直径； b）固定相的性质和数量； c）柱温； d）载气流速； e）所需的分离度； f）试验用量，选择检测器和静电计结合可给出线性响应的进样量； g）分析时间 通常，按表1和表2中给出的数值将得出预期的结果，即对于硬脂酸甲酯理论板数不少于2000/（米柱长），并可在15min内洗脱。 表1 管柱内径，mm 载气流速，ml/min 2 15～25 3 20～40 4 40～60 表2 固定相浓度（m/m），％ 柱温，℃ 5 175 10 180 15 185 20 185 如仪器性能允许，进样口温度应为约200℃，而检测器温度应等于或高于柱温。 作为一条规律，供给火焰离子化检测器的氢气流量与载气流量的比值应为1：2～1：1，这取决于管柱的直径。氧气（助燃气）的流量则5～10倍于氢气的流量。 3.1.2 毛细管柱 毛细管柱的效率和渗透性意味者各组分之间的分离和分析时间主要依赖于柱内的载气流速。因此必须根据操作者希望改善还是进行快速分析，按照此参数（或者更简单的根据色谱柱的压力损失）使操作条件达到最佳状态。 3.2 进样量 用注射器（2.2）取0.1～0.2μl按照GB/T 17376制备的甲酯溶液进样。 在溶液不含酯的情况下，可配制一种在色谱纯度庚烷中约为100mg/ml的溶液，取此溶液0.1～1μl进样。 如果检测衡量组分，试样量可以增大（至10倍）。 3.3 分析 通常，按3.1条规定的条件操作。 不过，在测定碳原子数少于12的脂肪酸时可能需要降低柱温，而测定多于20碳的脂肪酸时可能需要升高柱温。有时在上述两种情况下，也可能采用程序升温。例如，若试样中含有低于12碳的脂肪酸甲酯，可在100℃下进样（如有丁酸存在，则可在50～60℃进样）并立即以4～8℃/min的速率升至最佳温度。在某些情况下可以将这两个步骤结合起来。 程序升温后，在恒定温度下继续洗脱直至所有组分洗脱出来。如果仪器无程序升温，可在100℃和195℃两个固定温度下进行操作。 如有必要，例如在分析鱼油样品或同时存在着成对的C18：3和C20：0或C18:3和C18:2试样时，建议使用两种极性不同的固定相进行分析，以确认无被掩蔽的峰。 3.4标准色谱图和标准曲线的制备 用与试样相同的条件分析参比标准混合物（1.3），并测出各脂肪酸成分的保留时间或保留距离。在半对数坐标纸上以任意不饱和度作图，所得的曲线将显示保留时间或保留距离的对数是碳原子数的函数。在等温条件下，相同不饱和度的直链脂肪酸的曲线应是直线。这些直线大致上是平行的。 必须防止存在“隐蔽峰”，即在该处的分离度不足以分离两种组分。 4. 结果表示 4.1定性分析 由按3.4条绘制的曲线图上确定样品的甲酯峰，必要时可利用插入法。 4.2定量分析 4.2.1组成的测定 除意外情况外，通常使用内部归一化法，即假定试样的所有