临床生化仪器知识培训.pptVIP

主要内容介绍 基本分析原理 分析方法分类 反应度、定标参数和浓度计算 临床项目分类 项目主要测定原理和临床意义 测定结果的影响因素 仪器和试剂性能评价方法 基本分析原理 基本分析原理 吸收光谱法 透射比浊法 吸收光谱法 吸光度定义 一束强度为Io的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸光物质、厚度为L的吸收池时，一些光子被吸收，光强从Io衰减为It，则该溶液的吸光度A等于log(Io/It)。 Lamber-Beer定律 A=εCL 溶液的吸光度等于该溶液的吸光系数ε 、浓度C和光径L(cm)的乘积，当光径不变时，浓度和吸光度成正比。 Lamber-Beer定律成立的前提条件是稀溶液和单色光。 透射比浊法 一束强度为Io的平行单色光通过一个含有悬浮质点(颗粒大小与光源波长接近)的悬浮液或胶体溶液时，其透射光强度I可用下式表示： I=IoeιL 式中，L为悬浮液或胶体溶液在光前进方向上的长度，τ为浊度系数，与悬浮质点的浓度C成线性关系。令τ=2.3KC，则： Lg(Io/I)=KCL 与Lamber-Beer定律相似，这是生化分析仪利用透射比浊法进行定量测定的基础。 分析方法分类 终点法 固定时间法 动力学法 终点法(endpoint) 指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。 终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可。 固定时间法(fixed time) 固定时间法又被称为一级动力学法(first order kinetic)、初速率法(initial rate)、二点动力学法(two point rate)等。 在一定的反应时间内，反应速度与底物(被测物)浓度的一次方成正比,由于底物(被测物)在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加(或降低)速度越来越小，这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一段延迟时间才能进入稳定反应期，必需在特定时间段内进行监测。 对于任何一级反应，反应开始后在一给定时间t的底物浓度〔S〕为： 〔S〕= 〔So〕e-kt 〔So〕是最初的底物浓度，e是自然对数的底，k是速度常数。在t1到t2的固定时间间隔中，底物浓度的变化量Δ〔S〕与〔So〕的相互关系为： [So]＝(－△[S])/(e-kt1-e-kt2) 即在一固定时间间隔中，底物浓度的变化量正比于底物的初浓度。这是一级反应的通性。该段时间内吸光度的增加(或)降低与被测定物的浓度成正比。 固定时间法方法学上比终点法要求高，所有影响反应速率的因素如pH、温度及酶量必须在两点分析中保持恒定，并准确定时，必须同时用标准品定标。 动力学法(kinetic) 动力学法即通常所说的零级动力学法，也被称为连续监测法。 指反应过程中反应速度维持不变，与底物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(△A/min)与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。 实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样，由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。 反应度R(Response)的计算 定义：被测物与相应试剂在设定的条件下反应后所引起的吸光度的变化或变化率。 反应度与待测物的浓度存在特定的数学关系，据此可计算出待测物的浓度。 反应度R的计算 终点法 R=平衡点吸光度－试剂空白吸光度 固定时间法 R=起点吸光度－结束点吸光度 动力学法 R=起点和结束点间吸光度的变化率 测试流程 定标：测定标准品(浓度已知)的反应度，计算出浓度和反应度的数学关系(定标参数)。 样品和质控测定： 样品测定：测定样品(浓度未知)的反应度，根据定标计算出来的数学关系，计算出样品的浓度。 质控测定：测定质控品(浓度范围已知)的反应度，根据定标计算出来的数学关系，计算质控品的浓度，与该质控品的浓度范围比较，判断测试有无失控，是否存在系统误差或(和)偶然误差。 定标参数计算 定标分类：