第9章 电泳技术.pptVIP

第九章 电泳技术相关仪器 主讲人：周振华微信号：343783212 2 教学基本要求 掌握电泳基本原理 掌握电泳设备基本结构 熟悉临床常用的电泳分析方法 熟悉电泳仪的主要技术指标 了解影响电泳的外界因素 了解电泳技术的分类 了解毛细管凝胶电泳应用范围 内容提要 第一节 电泳仪概述 一、概述 电泳（electrophoresis）是指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。利用电泳现象将多组分样品分离、分析的技术叫做电泳技术。可以实现电泳分离技术的仪器称之为电泳仪。 返回目录 5 第一节 电泳原理 一、电泳的基本原理 物质分子在正常情况下一般不带电，但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同， 因而在一定的电场 中它们的移动方向 和移动速率也不同， 因此可使它们分离。 电泳现象和电渗现象 返回目录 6 第一节 电泳原理 若将带净电荷Q的粒子放入电场，则该粒子所受到的电荷引力为： F引=E Q 在溶液中,运动粒子与溶液之间存在阻力F阻 F阻=6πrηV 当F引=F阻时 EQ= 6πrηV V = EQ/6πrη 由上式可以看出,粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)和粒子所带电荷量(Q)成正比,而与粒子的半径(r)及溶液的粘度(η)成反比。 返回目录 7 二、影响电泳的外界因素 （一）电场强度 电场强度是在电场方向上单位长度的电势降落，也叫电势梯度。带电粒子在电场中移动速率（也叫泳速）与电场强度、带电粒子的净电荷和大小及形状、支撑介质的特性、操作温度等有关。电场强度越大，带电粒子受到的电场力愈大，泳动速度越快。反之亦然。 返回目录 8 二、影响电泳的外界因素 （二）溶液的pH值 溶液的pH值决定了带电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷的多少。当溶液的酸碱度处于某一特定pH值时，它将带有相同数量的正、负电荷，致使蛋白质分子在电场中不会移动，故此特定的pH值被称为该蛋白质的等电点。 对蛋白质、氨基酸等两性电解质而言，溶液的pH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快。反之，则越慢。 返回目录 9 二、影响电泳的外界因素 （三）溶液的离子强度 溶液的离子强度对带电粒子的泳动有影响，溶液的离子强度越高，颗粒泳动速度越慢。反之则越快。 离子强度太低，扩散现象严重，使分辨力明显降低，从而影响泳动的速率。 离子强度太高，会降低颗粒的泳动速度。 返回目录 10 二、影响电泳的外界因素 （四）粒子的迁移率 迁移率为带电粒子在单位电场强度下的移动速度，常用μ来表示，是一个由许多因素(包括离子半径、溶剂化作用、介电常数、溶剂粘度、离子形状和净电荷、溶液pH、解离度和温度等)决定的。 一般来说，颗粒带净电荷量越大或其直径越小，其形状越接近球形，在电场中的泳动速度就越快；反之，则越慢。 返回目录 11 二、影响电泳的外界因素 血清蛋白的电泳图谱 （四）粒子的迁移率 返回目录 12 二、影响电泳的外界因素 （五）电渗作用 当支持物不是绝对惰性物质时，常常会有一些离子基团如羧基、磺酸基、羟基等吸附溶液中的正离子，使靠近支持物的溶液相对带电，在电场作用下，此溶液层会向负极移动。反之，若支持物的离子基团吸附溶液中的负离子，则溶液层会向正极移动。这种在电场中溶液对于固体支持物的相对移动现象称为电渗。 返回目录 13 二、影响电泳的外界因素 （六）吸附作用 即介质对样品的滞留作用。它导致了样品的拖尾现象而降低了分辨率。纸的吸附作用最大，醋酸纤维素膜的吸附作用较小或无。 （七）其他 焦耳热、溶液黏度、湿度、电压稳定度和支持物筛孔均可影响电泳速度和质量。 返回目录 14 第二节 常用电泳仪的基本结构、性能指标与操作流程 一、常用电泳设备的基本结构 通常所说的电泳设备可分为主要设备和辅助设备。主要设备指电泳仪电源、电泳槽。辅助设备指恒温循环冷却装置、伏时积分器、凝胶烘干器等。有的还有分析检测装置。