正壬基酚及其同分异构体对小鼠Sertoli TM4细胞的影响及其分子机制的研究Study on the effect of NP and its isomers on Sertoli TM4 cells in mice and its molecular mechanism.pdf

万方数据 万方数据 摘要 摘要 壬基酚（Nonylphenols，NPs ）是一种环境毒性物质和内分泌干扰物，可对 雄性生殖系统产生危害。事实上，壬基酚并不是单一的化合物，而是带有一个 苯环和九碳侧链化合物的总称，因此壬基酚存在多种同分异构体。其中，九碳 侧链位于羟基对位的壬基酚被称为对壬基酚或者是 4-壬基酚，是最常见的壬基 酚形式且是研究的重点对象，九碳侧链为直链的4-NP 称为正-NP （4-n-NP ）。壬 基酚异构体的生物效应与其结构具有一定的相关性，因此有必要研究单个壬基 酚的生物活性。环境内分泌干扰物主要通过两种机制发挥作用，一是通过激活 细胞信号转导通路引起细胞的增殖或者凋亡；另一个是通过激素受体介导引起 内分泌干扰作用。本论文以正壬基酚（4-n-NP ）以及12 种 4-NP 异构体单体为 研究对象，以Sertoli TM4 细胞为靶细胞，运用细胞和分子生物学技术，从细胞 信号转导通路和内分泌干扰两个方面研究4-NP 异构体对TM4 细胞的影响及其 相关的分子机制，并通过比较差异探讨4-NP 异构体的侧链结构与其活性的相关 性。本文主要研究内容和结论归纳如下： 1. 4-NP 异构体对Sertoli TM4 细胞的细胞毒性作用 采用MTT 法检测细胞存活率以及流式检测细胞凋亡，结果发现，在低浓度 时，NP 、NP 以及NP 促进 TM4 细胞的生长，4-n-NP 、NP 、NP 、NP 、 9 10 37 65 70 111 NP 112、NP 143、NP 152、NP 194 处理显著诱导TM4 细胞的凋亡，由此可见除4-n-NP 外，壬基取代基主碳链长、取代基支链小（甲基）的壬基酚异构体可促进 TM4 细胞增殖；碳链越短、α-C 位置取代基基团越大越复杂的壬基酚异构体对Sertoli TM4 细胞凋亡的诱导越强。4-NP 异构体主要是通过引起细胞氧化损伤以及与 ROS 生成相关的线粒体信号通路诱导细胞凋亡。在80-100 µM 时，所有4-NP 异 构体通过直接毒性作用显著降低TM4 细胞的存活率。 2. 4-NP 异构体对Sertoli TM4 细胞内钙离子稳态的影响 用4-NP 异构体处理细胞24 h 后检测细胞内钙离子浓度变化及引起其变化的 相关机制。结果发现，NP65 、NP70 、NP 111、NP 112、NP 143、NP 152、NP 194 暴露能 够上调TM4 细胞内钙离子浓度，其中NP65 、NP70 、NP 111、NP 152 作用显著。4-NP 异构体对Sertoli TM4 内钙离子的调控作用与Ca2+-ATPase 活性，钙泵功能，钙 I 万方数据 摘要 离子通道激酶等因素有关。可见壬基酚取代基复杂、体积大（具有乙基或丙基 取代基）的异构体易导致TM4 细胞内钙离子浓度紊乱。 3. 4-NP 异构体对Sertoli TM4 细胞内MAPK 、Akt 信号转导通路的影响 采用western blot 的方法检测了4-NP 异构体对细胞内MAPK 信号通路和Akt 信号通路的影响。4-n-NP 、NP41 、NP42 、NP65 、NP 111、NP 112、NP 143、NP 152 均能 激活JNK 信号通路；4-n-NP 、NP 111、NP 112、NP 143、NP 152、NP 194 能够激活p38