极性脂质的质谱分析方法研究及其应用Study and application of mass spectrometric analysis of polar lipids.pdf

DissertationSubmittedto ZhejiangGongshang forMaster’S of University Engineering Degree OFPOLARLIPIDSAND M【ASSSPECTRUMANALYSIS ITSAPPLICATION Author：TingtingZhang Scienceand Major*-FoodEngineering Supervisor：ProfessorHongZhang Dec．2014 SchoolofFoodScienceand Biotechnology University Engineering，ZhejiangGongshang Hangzhou，310035，P．R．China 万方数据 ㈣嬲 极性脂质的质谱分析方法研究及其应用 摘要 本文主要分为四部分：第一部分建立了电喷雾串联三重四级杆质 谱的直接进样方法，分析样品中的六类磷脂和硫苷脂的分子种亚类组 成；第二部分建立了高效液相色谱和电喷雾串联三重四级杆质谱联用 方法，分析样品中神经酰胺、鞘磷脂、葡萄糖神经酰胺和乳糖神经酰 胺的分子种亚类组成；第三部分将直接进样分析方法和液质联用分析 方法结合在一起，设计自制进样装置及进样程序，实现极性脂质的同 时在线分析；第四部分将三文鱼油通过生物酶法转酯化结合到大豆卵 磷脂上，合成出含有丰富多烯磷脂的新型大豆卵磷脂，利用己建立的 极性脂质在线同时分析方法，分析比较改性前后大豆卵磷脂的分子种 差异。最终将新型大豆卵磷脂应用到脂质体的制备中，包裹胶原蛋白， 形成脂质体。 首先，本文建立了电喷雾串联三重四级杆质谱直接进样方法，对 六类磷脂(磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、 磷脂酸和磷脂酰甘油)和硫苷脂的分子种亚类组成进行测定。以鼠脑 为样本，先利用氯仿／甲醇法提取样品中的脂质，后利用固相萃取小 柱富集、纯化极性脂质。样品导入离子源后，在相应的母离子和中性 丢失扫描模式下实现一次进样检测分析六类磷脂和硫苷脂的目的。经 万方数据 验证，该方法的提取回收率(82．6％．104．2％)、日间精密度 (1．44．3．87)、日内精密度(2．74．5．87)、最低检出限(O．50．0．87 ng／m1) 和最低定量限(1．5—2．6 ng／m1)能够满足复杂生物样本中磷脂和硫苷 脂的分析要求。 其次，本文建立了高效液相色谱和电喷雾串联三重四级杆质谱联 用的方法，对神经酰胺、鞘磷脂、葡萄糖神经酰胺和乳糖神经酰胺的 分子种亚类组成进行测定。分析标准品在碰撞诱导活化解离过程中的 特征性碎片离子，建立相