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实验六：回收试验 一、实验目的 1．掌握GOD-POD法测定血糖的原理及临床意义。 2．掌握回收试验的原理和方法。 二、实验原理 1、GOD-POD法测血糖原理： 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。后者在过氧化物酶（peroxidase，POD）的作用下与色原性氧受体4-氨基安替比林偶联酚缩合成红色醌类化合物，即Trinder反应。该红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 四、试剂 1．血清标本 含血糖2.2mmol/L的血清 2．葡萄糖标准液（80mmol/L） 3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒 五、操作步骤 1、回收样品制备 基础样品：血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 回收样品Ⅰ：血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.09ml蒸馏水 回收样品Ⅱ：血清0.9ml+0.06ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.04ml蒸馏水 回收样品Ⅲ：血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.01ml蒸馏水 六、结果计算 4．计算结果请填入表内： 七、注意事项 八、方法学评价 一般检验方法要求回收率在95%～105%之间，最为理想的回收率应是100%。回收率接近100%，说明分析方法对于分析物无论在纯溶液中，还是在复杂的基体环境中，反应能力是一致的，分析物不受基体效应影响，若回收率明显偏离100%，说明分析物处于的基体环境不同，反应能力有明显差别。 *Allison Anne Welder, Ph.D. * * * * * * * * * * * 2、回收实验原理 将被测定物标准液加入病人标本中，作为分析样本；原病人标本中加入等量的无分析物的溶剂作为基础样本；用候选方法测定并得到各自浓度，计算回收浓度及回收率。通过测定GOD-POD法测血糖的回收率，能较确切地反映该分析方法比例系统误差的大小，从而对方法的准确性作出可靠评价。 微量移液器 三、器材 三用水浴箱 722型可见光分光光度计 计算器 2、按下表操作 1.5 1.5 1.5 1.5 酶酚试剂 0.01 0.01 — — 各个样品 — — 0.01 — 5.55mmol/糖标 — — — 0.01 DDW 回1 回基 S B 加入物（ml） 回2 — — 0.01 1.5 回3 — — 0.01 1.5 混匀，置水浴箱37℃，15分钟，505nm空白管调零， 722型分光光度计分别测各管A值。 1．加入浓度计算： 加入浓度(mmol/L)= 2．回收浓度计算： 回收浓度＝回收样品测得浓度－基础样品测得浓度 3．回收率计算： 回收率= ×100% 测定浓度 加入浓度 回收浓度 回收率 测定1 测定2 测定3 平均浓度 基础样品 回收样品Ⅰ 回收样品Ⅱ 平均回收率 回收样品Ⅲ 1．分析物浓度应选择在医学决定水平附近，通常设置高、中、低三个浓度的回收。 2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样品体积的10%，以避免将血清稀释过度，引起误差的改变或消失。 3．加量是否准确对实验结果影响很大。 * * * * * * * * * * * * * * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. * * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. * * * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. * * * * * * * * * * * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. * * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. * * * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. *Allison Anne Welder, Ph.D. * * * * * * * * * * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. * * ? 2004 McGraw-Hill Ryerson Ltd. *Al