药学毕业论文--HPLC法测定维他参颗粒中维生素B2的含量.docVIP

HPLC法测定维他参颗粒中维生素B2的含量 作者：卜文奎，杜娟，段广珍，张晓宇，张男 【关键词】 HPLC；Weitashen Granules；Vitamin B2 维他参颗粒由人参、山楂及多种维生素组成，维生素B2为该方的有效成分之一，维生素B2是人体中许多重要辅酶的组分。测定维生素B2 含量的方法有荧光分光光度法等，笔者采用HPLC法测定其含量，经方法学考察，其精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，为维他参颗粒的质量控制提供了实验依据，从而有效控制其质量。 1 仪器与试药维生素B2对照品（100369-200301，供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所，纯度大于98.5%。维他参颗粒自制，Agilent 1100 series高效液相色谱仪（G1311A Quat Pump，G1314A VWD，G1379A DEGASSER）；Agilent 1100工作站；CP225D（sartorius）十万分之一天平；AS3120A超声波清洗器；U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。 2 实验条件 2.1 色谱条件的选择 色谱柱：Agilent XDB-C18（5 μm，150 mm×4.6 mm）流动相：乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）。检测波长：246 nm；柱温：30 ℃；流量：1 ml/min；理论塔板数按维生素B2对照品峰计算不少于5000。 2.2 测定波长的选择 取少量维生素B2的标准品溶液，稀释，置U-3010紫外可见双光束扫描分光光度计下于200～400 nm波长下扫描，在225 nm、267 nm处均有最大吸收，选择267 nm作为HPLC的测定波长。 2.3 流动相的选择 经参阅文献［1～4］，分别对甲醇-0.05 mol/L，KH2PO4磷酸溶液（14∶86，pH 3.0）、甲醇-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（107∶500∶0.12∶4.6）、乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）、乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（5∶93.92∶0.21∶0.87）四种流动相系统进行筛选，结果维生素B2在乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）流动相条件下达到基线分离，峰形对称，维生素B2的阴性对照液无干扰，保留时间适宜。故确定维生素B2流动相为乙腈-0.008 mol/L己烷磺酸钠-三乙胺-冰醋酸（12∶87∶0.25∶0.75）。色谱图见图1、2。 2.4 对照品溶液制备 精密称取维生素B2对照品15.76 mg，置100 ml量瓶中，以乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液温热溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5 ml，置100 ml量瓶中，以乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含维生素B2 0.00788 mg的溶液。 2.5 线性关系考察 精密吸取维生素B2对照品溶液3、6、9、12、15、18 μl进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量x为横坐标、峰面积值y为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y=4038.2x-4.9208，r=0.9995，结果表明，维生素B2进样量在0.0473～0.2837 μg范围内线性关系良好。 2.6 供试品溶液制备 取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.3 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液25 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用乙腈-水-冰醋酸（5∶94∶1）的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 3 方法学考察 3.1 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μl，重复进样5次，测得峰面积，维生素B2积分值的相对标准偏差0.8%，表明仪器精密度良好。 3.2 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 μl，在0、2、4、6、8 h各进样10 μl，测其峰面积，维生素B2积分值的相对标准偏差为3.0%，说明样品在8 h内稳定。 3.3 重复性试验 精密称取供试品5份，每份约0.3 g，照供试品溶液制备方法制备，每次进样 10 μl，测维生素B2含量，结果维生素B2含量相对标准偏差为2.3%，表明方法重复性较好。 3.4 加样回收率 取已知维生素B2含量的样品（0.60 mg/g），研细，取5份样品，每份0.15 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入维生素B2对照品溶液5 ml（浓度为0.0169 mg/ml），再精密加入乙腈-水-冰