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α-地中海贫血基因诊断项目开展指南 一　α-地中海贫血基因诊断流程示意图 二　实验室建设 1最佳α-地中海贫血基因诊断实验室设计平面图 1） 实验室应具有试剂准备区、标本制备区、PCR扩增区及产物分析区（如上图） 2） 临床样本的收取及储存应该在这4个区域以外的地方完成。 3）进入各个工作区必须遵循严格的单一方向顺序。 4） 进入各工作区必须严格按照要求更换各区域特定颜色的工作服，并同时佩戴一次性手套。出工作区之前必须脱去区域特定工作服及手套。 5）每一个工作区都应有独立的一套仪器设备及耗材（包括移液器、离心机、试管架、一次性手套、移液吸头、离心管及冰箱等），且不同区域的仪器设备及耗材不能混用。 2实验室环境 1）工作区域必须始终保持清洁整齐 2）所有实验台面及地面均应保持清洁. 3）所有实验废料及垃圾使用专用垃圾袋装好后，封口处理。 4） 每次工作前后对工作台面进行消毒液擦洗、消毒酒精擦洗工作，并在完成工作后开启紫外灯进行灭菌。 3 实验室制度及人员配备 1）实验室必须有完整详细的操作规章制度并严格遵守。 2） 操作人员需要一定的专业技术知识和经验。 3） 操作人员需要有强烈的责任感，且工作认真细心。 4） 操作人员需要严格遵守α-地贫基因诊断的操作规程。 三　实验所需试剂、设备及其功能简介 α-地中海贫血基因诊断实验主要由以下三个实验组成：全血或羊水 DNA的抽提，基因扩增（PCR），电泳分析。 1 实验所需试剂 名称 目的 提供试剂 自备试剂 全血或羊水 DNA的抽提 提取DNA 全血DNA快速提取试剂盒 无水乙醇 基因扩增 用于扩增DNA样本 PCR反应液（-18℃以下保存），纯水，矿物油 无 电泳检测分析 分析各PCR扩增产物 无 电泳缓冲液、核酸染料、琼脂糖、上样缓冲液等 2 实验所需仪器（推荐使用）及功能简介 实验 所需试剂 所需仪器及部分耗材 功能简介 全血或羊水 DNA的抽提 使用全血或羊水 DNA抽提试剂盒 台式高速离心机 转速 13,000 rpm 将细胞与细胞保存液分开 超净工作台 为实验操作提供一个洁净，安全的操作环境。 真空旋转干燥仪 干燥沉淀 微量移液器 0.5-10μL，10-100μL,100-1000μL（专用） 微量加样和移液 1.5mL 离心管（已灭菌）及管架（专用） 已灭菌移液吸头（与移液器配套）（专用） 旋涡振荡器 转速：2800rpm 悬浮沉淀 工作服及一次性手套（专用） 保护操作人员同时防止实验污染 冰盒 维持PCR反应液的低温要求，避免PCR试剂因为温度的变化而对实验结果的影响。 冰箱（-20℃，4℃） 存放采集的样本及已抽提好的DNA样本 记号笔，计时器等 对不同样本进行编号及计时 全血或羊水细胞DNA扩增 PCR反应液 普通PCR仪 样本DNA在短时间里指数性的增长。 电泳检测 电泳试剂 电泳系统（电泳仪和电泳槽） 电泳分离不同大小的DNA片段 微波炉 快速加热液体 微量移液器一套（0.5-10,10-100μL,100-1000μL）（专用） 微量加样和移液 紫外透射分析仪（或凝胶成像系统） 观察电泳凝胶中已分离的DNA片段 电子天平/托盘天平 准确称量微量物质 移液吸头（与移液器配套）（已灭菌,专用） 和移液器配套使用，量取不同体积的液体试剂。 冰箱4℃ 放置电泳试剂 工作服及一次性手套 保护操作人员同时防止实验污染 记号笔及计时器等 对不同样本进行编号及计时 胶床，胶带纸，Parafilm膜，锥形瓶，锡纸，药匙，厚手套， 1.5mL离心管架，50mL量筒等 β-地中海贫血基因诊断项目开展指南 一　β－地中海贫血基因诊断实验工作流程 二　实验室建设 1最佳β-地中海贫血基因诊断实验室设计平面图 1） 实验室应具有试剂准备区、标本制备区、PCR扩增区及产物分析区（如上图） 2） 临床样本的收取及储存应该在这4个区域以外的地方完成。 3）进入各个工作区必须遵循严格的单一方向顺序。 4） 进入各工作区必须严格按照要求更换各区域特定颜色的工作服，并同时佩戴一次性手套,出工作区之前必须脱去区域特定工作服及手套。 5）每一个工作区都应有独立的一套仪器设备及耗材（包括移液器、离心机、试管架、一次性手套、移液器吸头、离心管及冰箱等），且不同区域的仪器设备及耗材不能混用。 2实验室环境 1）工作区域必须始终保持清洁整齐 2）所有实验台面及地面均应保持清洁. 3）所有实验废料及垃圾使用专用垃圾袋装好后，封口处理。 4） 每次工作前后对工作台面进行消毒液擦洗、消毒酒精擦洗工作，并在完成工作后开启紫外灯灭菌。 3 实验室制度及人员配备 1）实验室必须有完