第5章荧光分光光度计课件.pptVIP

光学分析仪器培训 * 第五章 荧光分析法 * 荧光分光光度计 * 荧光分光光度法 荧光分光光度法 当用紫外光照射某种物质时， 这些物质会发出各种颜色和 不同强度的光，当紫外光停 止照射时，这种光线也随之消失。 我们这种光线称为荧光。依据物质所发荧光的颜色和强度建立起来的定性和定量的分析方法称为荧光分光光度法。 1、荧光分光光度法简介 * 黄连 牛蒡子 元胡 浙贝母 * 可用荧光鉴别的中药 黄连：根茎折断面在紫外光下显金黄色荧光 浙贝母：粉末置于紫外光下呈亮淡绿色荧光 元胡：切面或粉末置于紫外光下，亮黄色荧光 牛蒡子：粉末，绿色荧光 麻黄：纵剖面，边缘显亮白色荧光，中心显棕色荧光 甘草：粉末显黄色荧光 黄柏：断面呈亮黄色荧光 * 荧光分光光度法 4、荧光分析中常用参数 ： F Λ（nm） 1、荧光物质都具有荧光激发光谱和发射光谱 2、荧光的激发光谱和发射光谱是用荧光分析法进行定量和定性分析时的基本参数和依据 激发光谱 发射光谱 * 荧光分光光度法 4、荧光分析中常用参数 F λ激发 激发光谱：当改变激发光波长，测量荧光物质在每一波长(λ)激发光照射下发射的荧光强度(F)，以荧光强度(F)为纵坐标，激发光波长(λ)为横坐标作图，得到荧光物质的激发光谱。 λem(max) 最大激发波长 常作为 入射波长 * 荧光分光光度法 4、荧光分析中常用参数 F λ发射 发射光谱（荧光光谱）：当用最大激发波长λem(max)照射荧光物质，测量荧光物质在照射下所发出的对应每一波长(λ)的荧光强度(F)，以F为纵坐标， λ为横坐标作图，得到荧光物质的发射光谱。 λex(max) 最大发射波长 常作为 测定波长 * 荧光分光光度法 4、荧光分析中常用参数 荧光分析法 优点：1、灵敏度高 检测限可达10-10-10-12 g/mL 2、定性更可靠 缺点：1、干扰因素较多 对实验条件要求严格，测量精密度差 2、应用范围有限但具有特殊重要性 能产生荧光的物质较少，但中药生化物质、致癌物质、天然产物都有荧光现象。 * 荧光分光光度法 3、荧光分光光度法的优缺点 3.1、优点： （1）灵敏度高 检测限可达10-10-10-12 g/mL，比紫外可见光度计高出3-4个数量级。 （2）定性更可靠 荧光分析可提供激发光谱、发射光谱、荧光强度、总荧光量、峰位、谱带宽度、量子产率、荧光寿命等参数。 干扰因素较多 * 荧光分光光度法 3、荧光分光光度法的特点 缺点： （3） 对实验条件要求严格，测量精密度差 （4）应用范围有限但具有特殊重要性 能产生荧光的物质较少，但中药生化物质、致癌物质、天然产物都有荧光现象。 * 定量依据 当其他条件固定、荧光物质溶液浓度很稀时，荧光强度(F)和荧光物质溶液浓度(c)成正比，即： F=Ac，A为常数 1、荧光分析法应在低浓度溶液中进行。 2、荧光强度是表示发射相对强度的物理量，它是最常用的荧光参数之一。单位为任意单位，表示的是相对强度。 * 荧光分光光度法 荧光分析仪器的结构和主要部件： 2、荧光分光光度计的基本结构 光源 激发单色器 样品室 发射单色器 检测器 显示装置 * 荧光分光光度法 2、荧光分光光度计的基本结构 2.1、光源： 对光源的要求是必须有足够的强度且具有连续光谱，其波长范围能满足仪器的需要。即：具有光强度大、适用波长范围宽两个特点。 先多用氙灯。 * 荧光分光光度法 2、荧光分光光度法简介 2.2、单色器： 单色器也是荧光分光度计的核心部件。它有两个单色器： 激发单色器：作用是从光源发射的复合光中获得单一波长的激发光。 发射单色器：作用是消除其他荧光光线和待测溶液中存在的干扰谱线，获得所需波长。 * 荧光分光光度法 2、荧光分光光度计的基本结构 2.3、样品池 多为用石英制成的厚度为1cm的长方形体，四面均为磨光面。所以使用时不能用手拿四面，应拿对角侧棱。--区别于紫外-可见分光光度计样品池 * 荧光分光光度法 2、荧光分光光度计的基本结构 2.4、检测器 荧光分光光度计常用的是光电倍增管 2.5、数据记录和处理系统： 利用计算机将测量到的荧光强度显示出来。 * 荧光分析法在药物分析中的应用 麦角碱、麻黄碱、吗啡、喹啉等生物碱，青霉素、四环素等抗