β3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞粘附和迁移中的作用.doc

β3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞粘附和迁移中的作用 中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2004,20(3):335—338 [文章编号】1000—4718{2004)o3—0335—04 ljl3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞 粘附和迁移中的作用* 郝玉宾,温进坤,韩梅 (河北医科大学基础医学研究所,河北省医学生物技术重点实验室,河北石家庄050017) ? 335? [摘要】目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)X{amp;整合素表达的影响及融整合素在PDGF促血管平滑肌 细胞(VSMC)粘附,迁移和增殖中的作用.方法:用抗amp;整合素胞外域抗体封闭VSMC岛整合素后,通过[H]一TdR 掺入,细胞粘附,细胞迁移分析及RT—PER等方法,检测PDGF对岛整合素表达及对VSMC粘附,迁移和增殖的影响. 结果:阻断岛整合素与细胞外基质(ECM)蛋白相互作用后,可在一定程度上抑制PDGF刺激的VS~IC增殖,使[SH]一 TdR掺入率降低39%;在岛整合素抗体浓度为10me/L时,PDGF引发的细胞粘附和迁移受到显着抑制(Plt;0.OS); PDGF作用于VSMC6h,融整合素基因表达活性达到峰值,比对照细胞高87%.结论:PI)GF可显着诱导整合素在 VSMC中表达;岛整合素与ECM蛋白相互作用在PDGF促VSMC粘附,迁移方面发挥重要作用. [关键词】整合素岛;血小板源性生长因子;肌,平滑,血管;粘连;细胞运动;基因表达 [中图分类号]R363[文献标识码]A 血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells, vSMC)迁移与增殖所引起的血管重塑是动脉粥样硬 化斑块形成和血管成形术后再狭窄等心血管疾病共 同的病理学特征.近年发现,VSMC的迁移与增殖除 了受血小板衍生生长因子(plateletderivedgrowthfac. tot,PD(),碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growthfactor,b阢F),血管内皮细胞生长因子(vascular endothelialgrowthfactor,VEGF)等影响外,还受细胞外 基质(extraceUularmatrix,ECM)中某些蛋白成分与整 合素(i~tcgrin)相互作用的调节【¨.越来越多的证据 表明,整合素不仅作为ECM的粘附分子发挥作用, 而且还能将细胞外的刺激信号转入细胞内,介导 E(IM蛋白与PDGF,bF1GF,VEGF等生长因子所引发的 细胞增殖和迁移反应2.我们曾报道,ECM成分骨 桥蛋白(osteopontJn,OeN)和纤连蛋白可显着诱导其 受体整合素的表达及促进VSMC迁移【3J,bFGF和 OPN在促进vSMC迁移与增殖方面具有协同作 用【4J.为了进一步揭示PDGF和ECM蛋白在促 VSMC迁移与增殖方面的相互关系,本研究用整 合素抗体阻断ECM蛋白与fi,整合素的相互作用,通 [收稿日期】2003—06—09[修回日期】2O03—08—03 *[基金项目】国家自然科学基金项目(NoNo;河北省自然科学基金项目(No.3o3455) #通讯作者Tel:(1311—6265563;E—ITlail:wjk@hehnu.edu.cn 过观察PDGF对fi,整合素表达及对VSMC粘附,迁移 和增殖的影响,探讨fi,整合素在PDGF促VSMC粘附 与迁移中所起的作用. 材料和方法 1材料 sD大鼠由河北省实验动物中心提供,PDGF购 自Oncogene公司,抗整合素N端胞外域抗体购自 SantaCruz公司,P(引物由上海生工公司合成,OPN 为本室制备,纯度98%. 2,,=培养 选5周龄SD大鼠,取胸腹主动脉,按贴块法分 离,培养vSMC.用抗SMa—actin单克隆抗体通过 免疫细胞化学方法对VSMC进行鉴定.0.25%胰蛋 白酶消化传代,取4—7代细胞进行实验. 3[H]一TdR掺入实验 细胞传代时,将用0.25%胰蛋白酶消化后离心 收集的细胞悬浮于含l%新生小牛血清(r-ecalf senlna,NCS)的培养基中,加入抗fi,整合素抗体至终 浓度为0,5,10,15IIL,37℃孵育45rain,洗去抗 体,将细胞重新悬浮于含l5LPDGF和l%NCS 的M199培养基中,接种至96孔板,培养12h,加入 [H]一TdR至终浓度为3.7×1o~keL,继续培养 12h,PBS洗3次,加入0.25%胰蛋白酶100ta../wdl, 4℃消化过夜.将细胞消化液滴于滤纸片上,吹干, ?336? 用液闪仪测定细胞样品[H]一TdR掺人率(counts? min一). 4细胞粘附实验 细胞传代时,将用0.25