龙血素B对牛蛙坐骨神经干兴奋传导的影响.docVIP

龙血素B对牛蛙坐骨神经干兴奋传导的影响 　　摘要：为研究龙血竭的有效成分龙血素B对牛蛙坐骨神经-腓肠肌的影响，采用不同浓度的龙血素B作用于牛蛙坐骨神经-腓肠肌标本，观察和分析了给药前后坐骨神经-腓肠肌最大收缩幅值。研究结果表明：不同浓度的龙血素B单体均能抑制坐骨神经-腓肠肌的最大收缩幅值，抑制率随着药物浓度增加而加强，到0.25 mg/mL浓度时达到最大抑制效果。龙血素B可能是通过影响坐骨神经干上的电压门控钠离子通道，进而影响坐骨神经干上动作电位的产生和传递，抑制腓肠肌的收缩。 　　关键词：龙血素B；坐骨神经；电压门控钠离子通道；动作电位 　　中图分类号：R337.3 　　文献标识?a：A 文章编号2017 　　1 引言 　　龙血竭是百合科植物剑叶龙血树的红色树脂，作为传统名贵民族药物，具有活血化瘀、定痛止血、敛创生肌等功效[1]，普遍认为龙血竭的有效成分为一类黄酮类化合物，其中龙血素B是鉴别龙血竭的指标性成分[2]。以往的电生理实验指出龙血竭是通过调制背根神经节上的电压门控钠离子通道影响痛觉信号的传入起到镇痛的作用，并且龙血素B等黄酮类物质是调制电压门控钠离子通道的主要作用因子[3]，而并不清楚龙血素B在组织中的镇痛效果和作用方式。酰胺类局麻药通过可逆结合电压门控钠离子通道阻滞钠离子内流从而抑制动作电位产生引起局部肌肉麻醉的机制[4]提供了一个可行的研究方案。本研究采用不同浓度的龙血素B溶液作用牛蛙坐骨神经-腓肠肌标本，利用生物机能实验系统采集坐骨神经-腓肠肌不同时间点的最大收缩幅值并进行分析，间接证明龙血素B对牛蛙外周神经兴奋传导的调制效果以验证其在组织中的作用效果是否与在细胞实验中具有一致性。 　　2 材料和方法 　　2.1 实验动物 　　牛蛙，不限雌雄，体重270±10 g，购买于湖北省实验动物中心。 　　2.2 实验仪器 　　四川泰盟科技BL-420E生物机能实验系统，肌张力换能器，刺激电极，神经标本屏蔽盒。 　　2.3 实验药品 　　实验中使用的龙血素B由广西壮族自治区中医药研究所提供，卢文杰教授鉴定。实验中按照一般实验溶液配制方法，将龙血素B加入任氏液中配制成不同浓度的溶液备用。溶液质量浓度分别为0.01 mg/mL、0.05 mg/mL、0.25 mg/mL、0.1 mg/mL、0.5 mg/mL。 　　2.4 实验方法 　　将实验用牛蛙按照常规方法制备成坐骨神经-腓肠肌标本，室温浸泡在任氏液中15min稳定后使用，神经肌肉标本随机分成6组，每组5条，神经干放置于肌槽上屏蔽盒中，坐骨神经端接入露丝刺激电极，每组神经干分别将坐骨神经端浸于任氏液中（空白对照）以及5种不同浓度溶液中，腓肠肌跟腱用扎线与肌张力换能器连接，连接后刺激测试初始肌张力，调整扎线松紧，确保每组初始肌张力值无明显差异。选择实验项目为刺激强度与反应的关系，将初始刺激强度设置为0 mV，增幅设置为5 mV，仅用任氏液浸泡坐骨神经干，进行刺激，记录0时刻和给药后5 min腓肠肌收缩曲线随后每2 min进行一次记录，直至33min共记录15个时间点收缩曲线，共记录5个标本，以观察时间对牛蛙坐骨神经-腓肠肌最大收缩幅值的影响；后将浸泡液换为质量浓度分别0.01 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL龙血素B溶液进行同样的刺激，观察给药前后各时间点最大收缩幅值，记录龙血素B溶液浸泡牛蛙坐骨神经干前后的坐骨神经-腓肠肌最大收缩幅值，以观察30 min以上仍收缩良好的坐骨神经-腓肠肌标本记录为有效记录。每种浓度的龙血素B溶液浸泡后药理效应的有效记录为5个标本。 　　2.5 数据分析和曲线拟合 　　2.5.1 数据分析 　　运用BL-420E生物机能实验系统中自带的测量功能在得到的收缩曲线上采集数据，获得每条曲线收缩最大幅值、最大刺激强度（产生收缩最大幅值时的刺激电压强度）以及阈刺激强度（肌肉开始收缩时的电压强度）。由于空白对照组收缩最大幅值、最大刺激强度、阈刺激强度在各时间点所得数据与0时刻三种数据值比较无显著性差异，将各时间点数据以0时刻数据作为标准进行归一化处理，使用归一化处理后的数值进行分析。同一浓度不同时刻数据用mean±sd表示，使用配对t检验和单因素方差分析进行检验，P0.05作为显著性检验的标准，所有数据使用SPSS分析，igor pro作图。 　　2.5.2 曲线拟合 　　（1）药物坐骨神经药物浓度依耐性。药物对腓肠肌最大收缩幅值肌张力的百分比抑制率（Inhibition%）用式（1）表示： 　　（2）药物对坐骨神经组织中作用方式分析。在本实验室之前的细胞实验中发现，龙血素B对DRG细胞膜上的电压门控钠离子通道