兽药残留量的检验.ppt

4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验—ELISA法 基本原理：微孔板包被有针对克伦特罗IgG的抗抗体；加入克伦特罗抗体，经过温育和洗涤后；加入酶标记物、标准或样品溶液，克伦特罗与酶标记物竞争与抗体结合；没有连接的克伦特罗酶标记物在被洗涤除去；加入酶底物和发色剂并且温育，结合的酶标记物将无色的发色剂为蓝色的产物，加入反应终止液使颜色有蓝转变为黄色。在450nm处比色测定。 GB/T 5009.192-2003《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》第三法——GC/MS法。 酶联免疫实验设计 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 实验的关键操作： 试剂盒的选择和准备； 试样的处理； 加样； 洗涤； 比色。 1）试剂盒的选择和准备 固相载体： 吸附性能，孔底透明度，板、孔性能差异； 包被物：纯度； 储存条件：2-8℃ ； 室温平衡：试验用试剂应提前1-2h从冰箱中取出，待温度与室温平衡后使用； 及时保存：试剂完毕后不需用的部分应及时放回冰箱保存。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 实验的关键操作 2）试样的处理 尽可能使用新鲜样本； 进行必要的前处理。 3）加样 加样前样本必须混合均匀； 加在板孔底部，避免加在孔壁上部； 不可溅出，不可产生气泡； 每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染； 加酶结合物和底物时可用定量多道加液器。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 4）温育 温育前必须震动混匀，但不可溅出； 温育的温度和时间应按规定力求准确； 温育必须避光。 5）洗涤 清洗必须彻底； 避免出现板孔干燥； 反转倾空微孔板要迅速，避免清洗液混合。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 6）显色和比色 显色的温度和时间应按规定力求准确； 显色必须避光； 使用多道加液器加终止液； 显色完毕后尽快比色测定。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 1）样本曲线偏离正常。 2）样本吸光值高于标准曲线的最大吸光值零标准。 3）样本吸光值低于标准曲线的最小吸光值。 常见问题 * 4.1 兽药与兽药残留 （研究背景、兽药残留产生的原因、类型、危害） 4.2 水产品中氯霉素的检验 （对虾中氯霉素含量的竞争性ELISA法检测） 4.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验 （猪组织中盐酸克伦特罗的GS/MS法检测、猪组织中盐酸克伦特罗的ELISA法检测 ） 第四章 兽药残留量的检验 内容要点： 兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质；也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲料添加剂。 现代化的动物集中饲养，经常需要使用抗生素或其他药物来控制可能爆发的疾病，同时有效使用兽药可以在很大程度上提高动物对饲料的利用率。 4.1 兽药与兽药残留 1、研究背景 1、研究背景 兽药的使用极易造成动物源食品中有害物质的残留，特别是由于养殖人员对科学知识的缺乏以及一味地追求经济利益，致使滥用兽药现象在畜牧业中普遍存在。 兽药残留：“兽药在动物源食品中的残留”的简称，是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及（或）其代谢物，以及与兽药有关的杂质。 兽药残留直接危害人体健康，影响畜牧业的发展和生态环境。随着人们对动物源食品由需求型向质量型的转变，兽药残留已逐渐成为全世界关注的一个焦点。 抗生素类：氯霉素、四环素、土霉素、青霉素等； 磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等； 呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等； 激素和β-兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等； 抗寄生虫类：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。 2、兽药残留的类型 非法使用违禁或淘汰药物； 不遵守休药期规定； 滥用药物； 违背有关标签的规定； 屠宰前用药。 3、兽药残留产生的原因 毒性损害; 引发过敏反应； 导致病原菌产生耐药性; 破坏微生态平衡，导致二重感染; 致畸、致癌、致突变作用; 影响生态环境； 影响畜牧业的发展。 4、兽药残留的危害 筛选方法 检测和确认方法：理化检验技术（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。 微生物检验（微生物抑制试验） 免疫法（免疫检测试剂盒） 阳性 5、兽药残留的分析方法 兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。 GC灵敏度较高，但易出现假阳性、阳性结果需进一步确证；HPLC操作简单，但灵敏度不高；ELISA简单、快速、灵敏度，但容易产生假阳性，一般只适用进行样品粗筛，阳性结果需进行确证