冰冻红细胞制备工艺的标准化和产品的质量控制.ppt

冰冻红细胞制备工艺的标准化和产品的质量控制 广州血液中心 赵阳 一、概述 二、标准化制备 三、质量控制 四、我们的工作 五、展望 一、概述 终浓度40%甘油处理的甘油化红细胞，可以保证-65℃以下红细胞内水不结冰，是国际通用的红细胞深低温保存技术。 手工法 M115半自动 ACP215全自动 国内许多血站都在使用ACP215进行红细胞甘油化和去甘油化的操作，将稀有血型红细胞冰冻保存。 时至今日，仍然可以发现操作规程中诸多与国外不同之处，值得商榷。 二、标准化制备 ⒈血液采集到甘油化间隔。 ●国内、外规定1-6天； ●国内个别血站用冰冻技术保存即将过期红细胞，冰冻红细胞质量难以保证。 ⒉甘油化前红细胞压积（Hct）。 国外作为甘油添加量公式的重要参数； 国内没有规定。 ⒊甘油添加量。 国外根据红细胞悬液重量，密度，压积参数，换算甘油添加量； 国内统一按1U红细胞悬液添加160ml 57%甘油，添加量与国外相距甚远。 为什么呢？？ 甘油添加量与国外出入很大，见于下面求解甘油添加量G的方程公式: （VRCC：红细胞悬液容量；Hct：红细胞悬液压积） 国内 (细胞外水+G)×40%=G×57% 即 (VRCC×(1-Hct)＋G)×40%=G×57% 国外 (细胞外水+细胞内水+G)×40%=G×57% 即 (VRCC×(1-Hct)＋VRCC×Hct×0.72＋G)×40% =G×57% 举例 采集200ml全血，28ml CPDA抗凝，分离120ml血浆。 RCC添加50ml MAP，Hct 0.55 VRCC=200+28-120+50=158ml≈150ml 添加甘油量 国内: （150×（1-0.55）+G）×40%=G×57% G= 158.8ml 国外： (150×(1-0.55)+150×0.55×0.72+G ) ×40%=G×57% G= 298.6ml 国内仅考虑红细胞外水（血浆）容量，忽视大量存在的红细胞内水。 国内公式结果甘油添加量偏低，甘油化红细胞的甘油终浓度将大大低于40%，严重影响红细胞冰冻保存效果。 因为甘油添加量涉及红细胞悬液Hct，所以必须检测甘油化前红细胞Hct。 ⒋洗涤液。 国外使用12％Nacl,0.9％NaCl-0.2％Glucose 国内使用9％Nacl，0.9％NaCl； 缺乏当初选择9％Nacl的实验数据支持。 ⒌冰冻洗涤红细胞保存液。 国外AS-1，AS-3等； 国内0.9％Nacl。 Table1 甘油化方法比较 Table2 去甘油化方法比较 三、质量控制 CSBT规定了冰冻红细胞终产品的质控指标，包括红细胞回收率，白细胞残留量，血小板残留量，上清甘油残余量，体外溶血试验等。 AABB还涉及中间产品的质量控制,如FT，FTW 。 1、 概念 freeze-thaw（FT）回收率。 融化红细胞总Hb FT= ———————————— ×100% 融化红细胞总Hb＋总上清Hb 反映甘油化，冰冻保存，融化冰晶对红细胞损伤情况。 freeze-thaw-wash（FTW）回收率。 洗涤红细胞总Hb FTW%= ——————— ×100% 融化红细胞总Hb 反映去甘油洗涤过程渗透压改变对红细胞影响。 2-1 34-46(gm%)甘油浓度 与 折光度 的相关性 C. Robert Valeri, G. Ragno Transfusion and Apheresis Science 36 (2007) 133–137 2-2 34-46(gm%)甘油浓度 与 渗透压 的相关性 C. Robert Valeri, G. Ragno Transfusion and Apheresis Science 36 (2007) 133–137 2-3 融化后甘油化红细胞上清渗透压 与 上清血红蛋白浓度的相关性