鸡卵粘蛋白的分离纯化、活性及分子量测定.doc

鸡卵粘蛋白的分离纯化、活性及分子量测定 潘颖，付浩亮，薛亚飞，杨海侠 （河北大学 生命科学学院 09生物技术，河北 保定,071002） 摘 要：目的 本实验从鸡蛋清中提取鸡卵类粘蛋白，并测定它的性质，掌握蛋白质的提取、分离纯化及性质测定技术。方法 先将鸡蛋清经三氯乙酸—丙酮溶液处理，除去沉淀物，然后经丙酮分级沉淀并采用透析的方法获得粗品，再经过DEAE纤维素柱层析纯化而得到纯品。采用BAEE法用紫外分光光度计测定粘蛋白的活性，最后用SDS—PAGE凝胶电泳法测得粘蛋白分子量。结果 粘蛋白活性为140U/m。粗品的分子量为72310,62719,48051,34348，纯品的分子量为34493。结论 此实验所利用的方法较好，但由于操作中的失误，并未达到预期效果。 关键词：鸡卵类粘蛋白；分离纯化；透析； DEAE纤维素柱层析；SDS—PAGE凝胶电泳法 The Separation and Purification of Chicken Ovomucoid and the Measurement of Chicken Ovomucoid’s Activity and Molecular Weight Pan Ying, Fu Hao-liang, Xue Ya-fei, Yang Hai-xia (Biotechnology in Grade 2009,College of Life Sciences,Hebei University,Baoding,Hebei,071002) Abstract: Objective In the experiment,firstly,we should gain the CHOM from egg white.It aim to mensurate CHOM’s activity and molecular weight..So we can acquire the technology of the experiment. Methods We should remove the egg white’desposit with TCA and ace,then acquire the gruff product from grade deposition and using dialysis,then we can get the eligibility product from DEAE cellulose column chromatography at last.After that we can measure its activity by DEAE method.We can know the mensurate protein’s molecular weight by SDS桺AGE gel electrophoresis. Results CHOM’s activity is 140U/mL.The gruff product’s molecular weight is 72337,62742,48072,34416.The eligibility product’s molecular weight is 34493. Conclusion The methods are good.As there are some faults in the experiment,we don’t have the results we want. Key words: Chicken ovomucoid(CHOM); separation and purification; dialysis; DEAE cellulose column chromatography; SDSgel electrophoresis 鸡卵类粘蛋白（chicken ovomucoid简称CHOM）是鸡蛋清中的一种糖蛋白，至今还未能获得单一组分，在电泳行为上常呈现不均一性。不同来源的卵类蛋白末端基有很大差别，鸡卵类蛋白N-末端基为丙氨酸。卵类粘蛋白在中性活酸性溶液中对热和高浓度的脲是相当稳定的，而在碱性溶液中比较不稳定，尤其温度较高是易迅速失活，在50%丙酮或10%三氯乙酸溶液中仍有较好的溶解度。它们的等电点有一定的范围，大致在3.9—4.5内。鸡卵粘蛋白除对牛和猪胰蛋白酶有强烈的抑制作用外，对枯草杆菌蛋白酶也有一定抑制作用，另外对人的胰蛋白酶液无明显抑制作用。在胰蛋白酶液中加入适量的CHOM，胰蛋白酶的活性就会被抑制，胰蛋白酶递减的活性就是CHOM的抑制活性[1]。本实验就对于这些特性而提取并分离纯化CHOM，并测定它的活性及分子量。 1 材料与方法 主要仪器 离心机，透析袋，层析柱，