猪血红细胞中超氧化物歧化酶和血红素同步提取纯化的研究.docVIP

猪血红细胞中超氧化物歧化酶和血红素同步提取纯化的研究 动物红细胞中富含超氧化物歧化酶(SOD)和血红素，SOD具有显著的抗氧化、抗辐射和抗衰老作用，血红素是抗贫血和抗肿瘤药物的重要原料[2，4，5，7]。为开发利用猪血红细胞资源以制取生化药品，我们开展了从猪血红细胞中同步提取SOD和血红素的研究。 1、材料与方法 （1）材料 猪血由合肥市郊区屠宰户提供； DEAE—SephadexA-50等化学试剂为国产进口产品，分析纯，购自于上海化学试剂商店； 供制备标准曲线的SOD和血红素等生化试剂为日本进口产品。 化学纯，购自于上海生化试剂商店。 （2）方法 SOD提纯与活力测定　 SOD提取采用袁氏改良的MccordandFridovich法[1，2]，SOD纯化采用DEAE—SephadexA-50层析法[2，6]，SOD活力测定采用邻苯三酚自氧化法(在1mL反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%时的酶量定为一个活力单位)[1，6]，酶蛋白浓度测定采用紫外吸收法。 图1　SOD与血红素同步提取纯化工艺流程 血红素提纯与含量测定　 血红素提取采用鞣酸(Tannicacid)法[3，5]，血红素纯化采用乙醇——乙醚洗涤法[3，5]，血红素含量测定采用紫外吸收法。 SOD与血红素同步提取纯化　 根据SOD和血红素存在于细胞内不同的亚单位结构中，我们设计了从猪血红细胞中同步提取SOD和血红素工艺流程，见图1.2　 2、结果 （1）SOD与血红素提纯结果 本试验从1000mL猪血的红细胞中同步提纯SOD和血红素，获得纯化的SOD酶蛋白14mg，总活力为142786×0.01667×10-6mol/s，最终比活为10199×0.01667×10-6mol/(s·mg)；获得精制血红素2518mg，纯度为91.5%。 （2）SOD与血红素紫外吸收测定结果 用上海分析仪器厂生产的GW751型分光光度计测得猪血SOD最大吸收值在262nm处(见图2—a)；猪血血红素最大吸收值在375nm处(见图2—b)。 图2　猪血红细胞超氧化物歧化酶(SOD)和血红素紫外吸收 3、讨论和小结 1)本试验提取的SOD，其产量、总活力、酶比活、活力回收率、紫外最大吸收值与经典的MccordandFridocich以及袁勤生等报道的基本一致[1，2，6]。 2)100mL猪血平均含血红素3820mg[8，9]，本实验从1000mL猪血中提取血红素2518mg，产率达65.9%，与日本进口的血红素产品标准曲线相对照，纯度达91.5%。3)本试验成功地从猪血红细胞中同步提取了产率与纯度较高的SOD和血红素，且工艺简单，成本低廉，为利用猪血资源提纯SOD和血红素及其大规模应用于医学临床提供了依据。