热处理对高温煎煮和低温酶法提制绿茶多糖影响.pdfVIP

第28卷 第4期 应 用 化 学 Vo_【28 Iss．4 2011年4月 CHINESEJOURNALOFAPPLIED CHEMISTRY Apr．2011 热处理对高温煎煮和低温酶法提制绿茶多糖的影响 陈小强 张志发 王川丕 何 自强 陈建新 陈红平 (“中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院 杭州 310016；华中科技大学同济医学院 武汉； 中国农业科学院茶叶研究所 杭州；武汉生物工程学院化学与环境工程系 武汉) 摘 要 采用复合酶法提取和二乙基氨基乙基 (DEAE)-纤维素52(DE-52)柱层析纯化制得茶多糖复合物 TPC一1；采用煎煮提取 、SephadexG一200柱层析纯化获得茶多糖 (TPC)复合物TPC-2。高效液相凝胶渗透色谱一 蒸发光散射检测表明，TPC一1和TPC-2经98cc水浴处理5h后，TPC．1的主要均一性组分 TPC—la裂变为 TPC一1a一1和TPC一1a-22个组分；圆二色(CD)谱显示TPC一1在 194nm呈现 1个正Cotton效应峰，热处理后在 216nm处增~JI]1个正Cotton效应峰；TPC一2经热处理后其中2种均一性组分TPC-2a和TPC-2b未变化，CD谱 显示TPC-2在203、215和272nm处均呈现显著的的正 Cotton效应峰，经热处理后前2个峰消失。98℃水浴 热处理改变了低温复合酶法提制的茶多糖复合物TPC一1溶液构象和均一性组分的分布，未改变沸水煎煮提制 的TPC-2的均一性组分的分布和凝胶色谱行为，但影响了其溶液构象。 关键词 茶多糖，高效液相凝胶渗透色谱一蒸发光散射检测，圆二色谱，均一性组分 中图分类号：0636．1 文献标识码 ：A 文章编号：1000-0518(2011)04-0454-04 D0I：10．3724／SP．J．1095．20l1．00087 茶多糖(TPC)是各类茶中含有的结合蛋白质的杂多糖复合物，是茶叶里的重要活性物质之一。TPC 在降血糖 、增强免疫、降血脂和抗氧化等方面具有显著功效 ¨ 。不同工艺提取的多糖化学成份、均一性 组分分布及平均相对分子质量等均可能有较大的差异。TPC提取工艺有煎煮浸提、酶法提取、超声波辅 助提取、稀碱提取等 。按提取的温度可分为高温提取 (如煎煮浸提)和低温提取 (如复合酶法提取 等)，不同的温度对茶多糖均一性组份分布和溶液构象有不同的影响。高温提取效率较高，茶多糖制备 多采用此法，关于提取温度对茶多糖的影响鲜有报道l，本文以低档绿茶为原料，分别采用低温复合酶 法H 和高温煎煮法 分别提取茶叶粗多糖，并经柱层析纯化获得茶多糖复合物，采用圆二色(CD)和 高效液相凝胶渗透色谱-蒸发光散射检测 (HPGPC—ELSD)技术，初步研究了2种方法提制的TPC溶液构 象和均一性组分分布的变化情况，这对茶多糖制备过程中产品质量控制和工艺优化有指导作用 。 ● 1 实验部分 1．1 试剂和仪器 低档绿茶，由龙井-43茶树鲜叶采制，二乙基氨基 乙醇 (DEAE)．纤维素 DE-52(美 国Whatman公 司)；SephadexG-200(美国Pharmacia公司)；UV一2550型紫外．可见分光光度计 (日本 Shimadzu公司)； j-815型圆二色光谱仪(13本分光 (JASCO)公司)；Agilent1100型系列高效液相色谱仪(HPLC)系统(美 国安捷伦公 司)；ALLTECH ELSD2000ES型蒸发光散射检测器 (美 国ALLTECH公司)；TSK—GEL G4OOOPWXL型凝胶色谱柱(日本TOSOH公司)。 1．2 实验方法 1．2．1 茶多糖样品的制备 复合酶法提取茶多糖参考文献 [4]方法，提制得到粗多糖。按文献 [8]酶 提制茶粗多糖，上DEAE一纤维素DE-52柱，以水和氯化钠溶液梯度洗脱，得茶多糖纯化主要部分TPC一1。 煎煮法提取按文献[4]进行，将茶叶沸水煎煮2h，过滤，按上述脱蛋 白、脱色和醇沉工艺及真空冷冻干 2010-02-03收稿，2010-09-29修回 浙江省