实验四 光电比浊法检验pH对微生物的影响.ppt

光电比浊法检验pH对微生物的影响 一、实验目的及要求 1.了解pH对微生物生长的影响，确定微生物生长所需要最适pH值条件。 2.了解光电比浊计数法的原理。 3.学习、掌握光电比浊计数法的操作方法。 二、基本原理(一) pH对微生物生命影响通过几方面： 1）蛋白质、核酸等生物大分子所带电荷发生变化从而影响活性； 2）引起细胞膜电荷变化，导致微生物细胞吸收营养物质能力改变； 3）改变环境中营养物质的可给性及有害物质的毒性。 pH在7.3附近最合适。在4-9范围内生长较合适。 二、基本原理（二） 当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。 用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度－菌数标准曲线。然后，以样品液所测得的光密度，从标准曲线中查出对应的菌数。 比浊法--在一定浓度范围内，菌悬液中细胞浓度与液体光密度成正比，与透光度成反比。菌数越多，透光量越低。通过光电比色计600nm测定光密度或透光率反映细胞的浓度。常用于观察和控制培养过程中微生物菌数的消长情况。如细菌生长曲线的测定和发酵罐中的细菌生长量的控制等。培养液的色调不宜过深，同时菌悬液浓度必须在107/ml以上才能显示可信的混浊度。其优缺点与直接测数法相同。 三、实验器材 1．菌种：大肠杆菌培养液 2．仪器、材料：722s分光光度计，试管，吸水纸，无菌吸管，无菌生理盐水等。 三、实验器材 培养基配置:牛肉膏蛋白胨液体培养基，牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，水1L，用1mol/L NaOH和1moll/L HCL分别调制3、5、7、9、11，每pH样品配200ml分装在20个大试管内，每管8ml。 无菌操作吸取0.3ml的菌悬液，接种于装有8ml不同pH的牛肉高蛋白胨液体大试管中。 将接种大肠杆菌的8支试管置于37℃室温保持24-48h。 将上述试管取出，利用722型分光光度计测定培养物在OD600nm值。 测OD值以无菌空白培养基为对照，不同浓度的菌悬液摇匀后于600nm波长测定OD值。 以光密度(OD)值为纵坐标，以每pH处理为横坐标，绘制标准曲线。 四、操作步骤 1．标准曲线制作 （1）编号 取无菌试管6支，分别编号为1、2、3、4、5、6。 （2）测OD值以无菌生理盐水作空白对照，不同浓度的菌悬液摇匀后于600nm波长测定OD值。 (3)以光密度(OD)值为纵坐标，以每毫升细胞数为横坐标，绘制标准曲线。 2．样品稀释 待测样品如果浓度较高，可以统一稀释相同倍数。600nm波长测定光密度。 五、实验报告 1.结果 测定的结果以光密度(OD)值为纵坐标，以每毫升细胞数为横坐标，绘制标准曲线。 2．思考题 (1)光电比浊计数这种计数法有何优缺点? (2)光电比浊计数在生产实践中有何应用价值? * * 四、操作步骤