生物工程实验室关键设备.ppt

第一章 生物工程实验室关键设备 生物技术的开发，首先要在实验室中进行，为取得满意的实验效果，一定要配备相关的设备用以满足需要。 实验室设备用途 灭菌及消毒 菌种培养 菌种保藏 分离和提取 样品分析 第一节 无菌操作 混合培养（Mixed culture）和纯培养（pure culture） 纯培养是生物工程实验室最基本的常规实验操作。 无菌操作→灭菌 一、灭菌的方法及实验室灭菌设备 灭菌：用物理或化学的方法将杀死或除去所有微生物。 消毒：除去致病或有害微生物。 1、实验室热杀菌设备 干热灭菌→干燥箱 湿热灭菌→蒸汽灭菌器 （1）干燥箱（烘箱） 操作条件：160oC保持2 h或170oC保持1.5 h。 适用范围：玻璃、金属制品。 操作要求 用牛皮纸或棉布包裹（不能超过180oC→焦枯或燃烧） 器具灭菌前洗净（残留培养基加热焦枯） （2）蒸汽灭菌器 灭菌方法 操作条件：121oC，30 min。 原理：借助于蒸汽释放的热能使微生物的大分子内部的化学键（主要是氢键）受到破坏，引起不可逆的变性导致微生物死亡。 蒸汽优点：很强的穿透能力，冷凝释放大量热量，来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠。 2、化学消毒 一般用来除去空间、管道、设备以及容器中的微生物。 化学消毒剂：气体、液体或粉状（甲醛、环氧乙烷、酚化合物、含活性氯化合物、亚硫酸、表面活性剂等）。 注意配制时对器具的要求及应用范围 甲醛→空间消毒（主要用于表面灭菌） 环氧乙烷→塑料制品（易穿透到疏松物质中） 酚化合物→实验室消毒地板 表面活性剂→容器、管道及其他设备的灭菌 亚硫酸→葡萄酒酒桶（燃烧硫磺） 碳酸→厌氧培养（排除氧气） 3、紫外线 原理：产生臭氧。 透过物质能力差 接种室、超净工作台、无菌培养室和手术室空气及物体表面灭菌。 距离物体不超过1.2 m。 4、过滤除菌 培养基成分受热易破坏。 常用微孔滤膜滤器 0.22~0.45 μm孔径 二、无菌操作间及超净工作台 无菌操作间：建筑要求光滑，密封性好，干燥。室内设紫外灯（30W开启1h）。化学消毒剂定期消毒。 超净工作台 鼓风机鼓入空气→粗滤→超滤→无菌空气 超净工作台使用方法！ 三、无菌操作 客观条件：灭菌设备和无菌环境 主观条件：无菌操作意识贯穿操作过程。 蒸汽灭菌锅灭菌→锅内冷空气排尽，物品不过于拥挤。 灭菌后物品放入无菌室→减少表面污染 器具口及接种用具进行火焰灭菌要彻底 移液管 …… 第二节 菌种培养 一 、静置培养 试管斜面 平板 厌氧培养 培养箱 厌氧罐 二、摇瓶和摇瓶机 1、摇瓶 2、摇瓶机（摇床） 菌种繁殖、菌种筛选和培养基优化。 主要部件：支持台、电动机和控制系统等。 容量：250~1000 ml摇瓶（有时可放50 ml摇瓶或试管） 水浴与气浴；旋转式和往复式 摇瓶机 滚瓶机 第三节 菌种保藏设备 菌种保藏方法 冰箱保藏 石蜡油封保存法 沙土管保存法 真空冷冻干燥保存法 深冷保藏 固体曲保藏法 …… 深冷保藏 将培养好的供藏菌种在-18oC或-80oC低温冰箱中深度冷冻,或在液氮中冷至-196oC即可。 优点：操作方便 缺点：冻融引起大部分细胞死亡，存活率仅5%左右。 第四节 发酵液处理及产物提取 固液分离→离心、过滤、… 细胞破壁 萃取 浓缩 … 台式低速大容量离心机 超声波细胞破碎仪 空化效应。 用途 动植物细胞、细菌、病毒破碎； 乳化、分离、匀化、提取、消泡、清洗及加速化学反应等。 旋转蒸发仪 第五节 实验样品的分析检测 大家在实验室检测样品时用过哪些仪器设备？ pH计 分光光度计 高效液相色谱仪 酶标仪 细胞活力分析设备 染色法（显微镜） 平板计数法（平板） 细胞活力分析仪 * 过滤除菌 无菌操作 二氧化碳培养箱 转/滚瓶 *