绵羊Myostatin基因5′调控区的生物信息学及孕激素对调控区活性的影响.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(9):1814-1825 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.09.017 绵羊Myostatin基因5′ 及孕激素对调控区活性的影响 1,2 1 1 1 秦 健 , 杜 娟 , 杨亚群 , 杜 荣 1 2 （山西农业大学动物科技学院； 山西农业大学信息科学与工程学院分析测试中心，山西太谷 030801 ） 摘要：【目的】克隆并分析绵羊Myostatin基因5′调控区，并在细胞水平研究孕激素对该调控区活性的影响。【方法】 利用PCR方法扩增绵羊 Myostatin基因5′调控区，采用MatInspector 等软件分析并比较其和牛、猪调控区的调控元件和 转录因子。以EGFP为报告基因，构建表达载体，转染C2C12细胞，同时添加不同剂量的孕激素（0、10、100和1 000 nmol·L-1 ）， 然后通过RT-PCR 方法检测报告基因 EGFP 和内源性Myostatin的mRNA水平。【结果】获得绵羊约3.2 kb Myostatin基因 5′调控区（MSTN5′regu），预测了两个对双肌性状可能存在贡献的位点。在绵羊、牛和猪的相应调控区发现了许多可能对该 基因转录调控起重要作用的调控元件和相应转录因子，包括 E-box、MEF2、MTATA、MTBF、HOMF、PRE、ARE和GRE等。各 种元件在不同动物间基本都有，但具体的序列、位置以及数量有所差异。成功构建了绵羊 pMSTN5′regu-EGFP 表达载体， 且转染后 100 nmol·L-1 孕激素明显抑制了内源性Myostatin mRNA 和报告基因 EGFP mRNA 的表达。【结论】绵羊Myostatin 基因的转录受多种转录因子和相应调控元件的调控，适量孕激素可通过下调Myostatin基因5′调控区的活性而抑制该基因 的转录。 关键词：绵羊；Myostatin基因 5′调控区; 生物信息学分析; 调控元件; 转录因子; 孕激素 Bioinformatic Analysis of Myostatin Gene 5′ Regulatory Region from Sheep and Effect of Progesterone on the Activity of the Regulatory Region 1,2 1 1 1 QIN Jian , DU Juan , YANG Ya-qun , DU Rong 1 2 ( College of Animal Science and Technology, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, Shanxi; College of Information Science and Engineering, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, Shanxi) Abstract: 【Objective 】 The a