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第八章 分离分析法导论 一、色谱分析法及其基本概念 2、色谱法分类 气相色谱（GC） 气液色谱（固定相为固定液，即固定相是附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体） 气固色谱（固定相是固体吸附剂） 液相色谱（LC） 液液色谱 液固色谱 （3）按分离原理分 吸附色谱（利用组分在固定相上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法） 分配色谱（利用组分在（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法） 离子交换色谱（利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法） 排阻色谱（利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，又称凝胶色谱法） 3、色谱图及常用术语 （1）色谱图：试样各组分经色谱分离后，从柱后流出进入检测器，检测器将各组分浓度（或质量）的变化转换为电信号（电压或电流），再由记录仪记录下来，所得的电信号强度随时间变化的曲线，即为流出曲线，也称为色谱图，曲线上突起部分就是色谱峰。 （2）常用术语 ①基线：柱中只有流动相流过时，检测器的响应信号记录值，稳定的直线应是一条水平直线。 ③保留值：表示试样中各组分在色谱柱内停留状况的指标，反映组分分子与固定相分子间作用力的大小，通常用时间和流动相的体积表示。 （3）分配平衡 样品在固定相与流动相之间进行分配，很快达到平衡，即分配平衡。当流动相流过时，样品将在流动相和新的固定相中又达到分配平衡，同时原来仍在固定相中的样品与新的流动相之间也会形成新的分配平衡，随着流动相的不断流过，它们携带发生分配平衡后仍存在于流动相中的样品沿着柱子向前流动，从而达到不同组分分离的目的。 分配比影响因素：组分、流动相和固定相的热力学性质；温度和压力等因素；流动相及固定相的体积。 两组分的分配系数有差异 区域扩散速率小于区域分离速率 1、塔板理论 结论： n与半峰宽及峰底宽的关系 n大于50，可得到峰形基本对称的曲线 只要被分离组分K有差异，只要n足够大，经过反复多次的分配后均可进行分离 理论优点：解释了流出曲线的形状，提出了计算和评价柱效能高低的因素（n ） 如果若tR一定，那么n越大，H越小，则色谱峰越窄，柱效能越高。 理论缺点： （1）色谱过纵向扩散等不能忽略， （2）塔板理论只能定性地给出板高的概念，不能解释板高受哪些因素影响，无法提出降低塔板高度的方法 （3）不能说明为什么在不同的流速下，可以测得不同的理论塔板数 （4）分配系数与浓度无关只能在有限的浓度范围内成立 （5）色谱柱中没有真正的平衡体系 2、速率理论 1956年，荷兰，范弟姆特，速率理论 A-涡流扩散项 由于流动相流经填充物的不规则空隙时，其流动方向改变，形成紊乱的类似“涡流”的流动而引起 B/u-分子扩散项（纵向扩散项） 样品在纵向上的浓度梯度而造成的扩散 Cū-传质阻力项 物质迁移过程中存在的阻力 范氏方程 3、色谱分离效能的衡量 柱效：色谱分离的动力学因素，由理论塔板数来衡量。如果若tR一定，那么n越大，H越小，则色谱峰越窄，柱效能越高。 选择性：两峰间的距离衡量色谱的选择性，距离越大选择性越好，一般以?表示 分离度 分离度概念：又叫分辨率或分辨度，色谱峰中相邻两峰分离程度的量度，是相邻两峰保留值之差与两峰峰底宽的平均值之比。 n越大，R越大——n=L/H， (R1/R2)2 = n1/n2 = L1/L2 增加柱长的色谱柱可以提高分离度，但延长了分析时间。 制备一根性能优良的柱子，通过降低板高，以提高分离度。 已知物质A和B在一根30.00 cm长的柱上的保留时间分别为16.40 min和17.63 min。不被保留组分通过该柱的时间为1.30 min。峰底宽度分别为1.11 min和1.21 min，计算：（1）柱的分离度；（2）柱的平均塔板数；（3）达到1.5分离度所需的柱长度。 三、色谱的定性分析和定量分析 与标样对照的方法 保留值法（单柱法和双柱法） 相对保留值法 已知物的峰高加入法 保留指数定性法（柯瓦指数） 例：确定物质i在某固定液X上的保留指数IiX 的数值。 2、色谱定量分析 定量分析基础：待测组分的质量或浓度与色谱峰的峰面积或峰高成正比 （1）校正因子 绝对校正因子 （2）定量方法 归一化法；内标法；外标法 内标法：将一定量的纯物质作为内标物加入到准确称量的试样中，根据试样和内标物的质量以及被测组分和内标物的峰面积或峰高求出组分的含量 内标物要求： 试样中不存在 性质与被测物相近，能完全溶于样品中，但不与样品反应 内标物的峰与试样各组分的峰完全分开，且