[医疗保健]基因工程实验.pptVIP

DNA模板：以pPIC9-NGAL为模板，来扩增不包含信号肽序列的NGAL编码区 引物： PCR上游引物（P1）：5′-CGCCTCGAGAAAAGACAGGACTCCACCTCA -3′ PCR下游引物（P2）：5′-CGGAATTCTCAGCCGTCGATACACTGGTC -3′ 底下有横线的碱基为酶切位点：XholI (P1)，EcoRI(P2) 2×Taq PCR Master Mix （广州佰路生物科技有限公司生产，产品成份为： 0.1 U Taq DNA Polymerase/ml 500 mM dNTP each 50 mM Tris-HCl (pH8.7) 20 mM KCl 4 mM MgCl2 无菌水 100bp plus ladder DNA marker 本实验所用试剂 实验操作 95℃ 2min 94℃ 30s 60℃ 30s 72℃ 30s 72℃ 5min 30个循环 按以下次序将各成分加PCR管中。 2×Taq PCR MasterMix 5 μl P1 (12.5 μM ) 1 μl P2 (12.5 μM) 1 μl 无菌水 2 μl pPIC9-NGAL 1 μl 反应体系：10 μl 混匀，稍加离心并标记。 PCR反应于ABI 2720 Thermer cycler进行，PCR反应条件： 精品PPT课件 浏览免费 下载后可以编辑修改。 /jn-lxh /lianer2012 / / / 炎中药方-肺胃郁热 　　【肺炎症状】身热有汗不解，咳嗽痰内见红，舌苔薄腻而黄，脉濡滑数。 　　【肺炎治法】清宣肺胃而化痰热 　　【肺炎方药】嫩前胡4.5克，清水豆卷12克，水炙桑叶9克，金银花9克，连翘壳9克，光杏仁9克，象贝粉4.5克，黑山栀9克，生甘草3克 　　【用法】水煎服。 　　【肺炎按语】风温，身热有汗不解，无形寒头痛之象，病邪由表入里，尚在卫、气之间。叶香岩谓“在卫汗之可也，到气才可清气”，故治以栀子豉汤法清气透卫。以其身热汗出，表卫已虚，故透卫仅取 　　桑叶、豆卷等微幸微甘之品，勿令重虚其表，庶免汗多亡阳；以其已具脉数、苔黄之侯，尚无烦躁、口渴等症，里热未炽，故清气只用银花、连翘、山栀等轻清之品，使药力不犯中下二焦，勿令药过病所；以其“未传心包，邪尚在肺”，故以前胡、杏仁、象贝粉等宣肺化痰。 　　4.肺炎中药方-痰热雍肺，木火侮金 　　【肺炎症状】壮热不退，恶寒，午后更甚，咳嗽急促，痰稠量少，胸胁窜痛，咳嗽尤甚，口干苦，不饮食，小便黄涩，大便干燥，舌红苔黄白较厚，舌根腻，脉细数。 　　【肺炎治法】清肺豁痰，平肝降火 　　【肺炎方药】龙胆草，草栀子，木通，泽泻，生地白花蛇，舌草，黄苓，法半夏，栝萎仁（无药量记载） 　　【用法】水煎服。 　　【肺炎按语】由于肝气郁结，气郁化火，木火刑金，肺金失肃，因而咳嗽阵作；肝胆火旺则口苦；肝气太过，故胸胁窜痛，性急易怒。方用龙胆泻肝汤清肝泻火，加小陷胸汤清热化痰开胸。特点之一。 综合医学 * 基因工程实验 实验五 引物设计及PCR扩增靶基因 PCR引物设计 引物决定了PCR产物的长度和特异性。目前有多种引物设计软件，如primer premier5、Oligo和北京军事医学科学院李伍举教授开发的Biosun等，Internet免费引物设计网站有primer 3，Primerfinder等。 引物设计有以下几个原则： （1）引物的特异性。引物应根据目的序列进行设计，引物与非靶序列之间不要超过 70％的同源性或连续8个的碱基互补，减少非特异产物； （2）引物的长度。一般指引物中能与模板序列互补结合的部分，不包括在5‘端额外增加的酶切位点序列和其他序列。引物长度以18～24 bp为佳。 （3）引物3’末端的碱基。引物3’末端是延伸的始端，碱基错配会影响延伸效率。当最后一个碱基是A时，容易发生错配，所以引物3’末端最好不要为A； （4）引物的G+C含量一般为40％～60％，过高或过低都不利于引发反应； （5）两条引物不能形成稳定的二聚体，或引物自身不能形成稳定的二级发夹结构，这些都会影响引物与模