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狂犬病毒及其检验 济宁医学院医学检验教研室 内 容 狂犬病流行病学 狂犬病病原学 人类狂犬病的发病机理及临床表现 狂犬病的检验 狂犬病流行病学 建国以来全国狂犬病报告发病情况 1996年全国狂犬病报告病例地理分布 2000年全国狂犬病报告病例地理分布 2004年全国狂犬病报告病例地理分布 狂犬病的易感人群和分布特征 人群普遍易感 发病人群的差异因接触犬机会的多少所致 儿童狂犬病的特殊性 发病率高，15岁以下儿童占发病数的40％以上。 极易咬伤头面部、颈部及上肢。 被抓伤或咬伤后，未及时告诉监护人，未能得到及时处置，所以容易被忽视。 结 构 狂犬病病毒的理化特性 对脂溶剂（肥皂水、氯仿、丙酮等）、乙醇、甲醛、碘制剂以及季胺类化合物、酸（PH 4以下），碱（PH 10以上）敏感； 对日光、紫外线和热敏感，病毒悬液经56℃ 30～60分钟或100℃ 2分钟即失去活力，易被巴氏消毒法消毒； 不易被酚或来苏尔溶液杀灭； 对干燥、反复冻融有一定抵抗力。 狂犬病致病机理 狂犬病检验 狂犬病诊断标准 3.1流行病学史 有感染史（被犬、猫、野生食肉动物以及食虫和吸血蝙蝠等宿主动物咬伤、抓伤、舔舐粘膜或伤口）。 3.2?临床症状 3.2.1??伤口周围感觉异常、麻木发痒、刺痛或蚁走感。出现兴奋、烦躁、恐惧，对外界刺激如风、水、光、声等异常敏感。 3.2.2???“恐水”症状，伴交感神经兴奋性亢进（流涎、多汗、心律快、血压增高），继而肌肉瘫痪或颅神经瘫痪（失音、失语、心律不齐）。 3.3实验室检查 3.3.1免疫荧光抗体法检测抗原：发病第一周内取唾液、鼻咽洗液、角膜印片、皮肤切片，用荧光抗体染色，狂犬病病毒抗原阳性，或用RT-PCR方法检测狂犬病毒核酸阳性 。 3.3.2 细胞培养法从病人标本中分离到狂犬病毒。 3.3.3 死后脑组织标本病毒分离阳性或荧光抗体染色阳性或检到内基氏小体。 病例分类 1.临床诊断病例：具备3.1加3.2.1或3.2.2。 2.确诊病例：临床诊断病例加3.3的任一条。 狂犬病的免疫处理 人对狂犬病毒的易感性 ?人对狂犬病毒没有自然免疫力，无隐性感染者。 ?人被疯动物咬伤抓伤后狂犬病的发生率为30-70%，如能正确处理伤口、使用疫苗和抗血清，发生率可降到1%以下。 对于WHO推荐方案中的III类暴露以及野生动物咬伤的II类以上的暴露，在接种疫苗的同时，要在伤口周围浸润注射抗狂犬病免疫血清或球蛋白。 抗狂犬病免疫球蛋白/血清的使用方法 使用马的抗血清的注意事项： 注射首针疫苗后7天内，仍应注射抗血清或免疫球蛋白， 理由： 1、因为此时人体的主动免疫尚未产生。 2、局部浸润注射的球蛋白对于血清中 的抗狂犬病毒中和抗体水平可忽略不计。 狂犬病疫苗的抗体检测 世界卫生组织推荐两种标准的抗体检测方法： 小鼠中和法 快速免疫荧光灶抑制试验（RFFIT） 目前国内所用的ELISA试剂盒均无国家证书 ELISA方法测定的是总抗体，不代表具有保护性的中和抗体水平，其结果仅供参考。 预防免疫，越早越好 一旦感染 (被动物致伤) 一旦与外周神经结合 病毒开始在伤口局部复制繁殖 一旦症状出现 病毒开始向中枢神经系统移动 死亡几乎不可避免 潜伏期 感染 前驱症状 临床症状 昏迷和死亡 ? ? 在侵入神经系统前及早采取措施 侵入神经系统后没有任何有效手段阻止病程发展 暴露后处理的步骤 第一步: 立即进行局部伤口的处理，适用于所有类型的暴露 第二步:应根据患者疫苗接种史和伤口类型进行不同的处理 (WHO 关于暴露后免疫的指导原则) WHO 对暴露后处理的指导原则 立刻注射抗狂犬病免疫球蛋白和 疫苗 * 单一或多处贯通皮肤性咬伤或擦伤，粘膜被唾液污染（如：舔触） III 立即接种疫苗* 轻度咬伤无防护皮肤，无出血性轻微抓伤或擦伤、舔触破损皮肤 II 如确认无接触史，无需治疗 抚养或喂养动物，被舔触无损伤的皮肤 I 推荐处理方法 接触类型 类别 如果非流行区明显健康的猫或狗被隔离观察或被实验室检验后证实未感染狂犬病毒，则可以终止治疗。本条款不提倡在中国国内使用。 暴露于啮齿动物（包括鼠、兔等），也需要暴露后免疫治疗。 暴露于蝙蝠者，按照III类伤口处理 暴露后免疫 － 局部