2011310第二章 第二节红细胞检验.ppt

第二章???血液一般检验第一节红细胞检查 P48-67 一.红细胞计数red blood cell,RBC (一)、原理 1.显微镜计数法:用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入血细胞计数盘，然后于显微镜下，计数一定范围内的红细胞数，经过换算即可求得每升血液中红细胞数。（XXX ×1012/L） 2.血液分析仪法:电阻抗或流式细胞术激光检测法原理 (二)、质量保证:技术、仪器、分布误差 （三）、参考值《全国临床检验操作规程》第二版 成年男性：(4.0～5.5)×1012/L 成年女性：(3.5～5.0)×1012/L 新生儿： (6.0～7.0)×1012/L (四)、临床意义与血红蛋白意义相似 二??. 血红蛋白测定 （Hemoglobin Hb） (一) .Hb的结构 1、血红蛋白由珠蛋白和亚铁血红素组成，分子量为64458，它是一种呼吸载体，每克血红蛋白可携带氧1.34ml。 血红蛋白由4条多肽链组成，每条有1个分子的亚铁血红素。组成Hb的多肽链分为α和非α两大类：①α类链：α，ζ和θ链；②非α链：β，δ，γ，ε链。α链由141个氨基酸组成，β链由146个氨基酸组成。 2、珠蛋白肽链有三种形式： HbA（α2?2），成人主要血红蛋白，约97%。 HbA2（α2δ2），成人次要血红蛋白，约2-3%。 HbF（α2γ2），胎儿血红蛋白，约2%。 Fe2+有6个配位键， 4个与原卟啉环连接， 1个与珠蛋白连接， 1个与O2结合。 （三）. 血红蛋白Hb测定 即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。 （xx g/L） 血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。 Hb测定的方法 1、 测铁法：1gHb—3.47mgFe 2、 测氧法：1gHb—1.34mlO2 此两种方法较准确，但不易操作。 目光比色法：沙利氏法，现已淘汰。 3、比色法 光电比色法：常用，有HiCN、SDS-Hb 1966年国际血液学委员会 HiCN是测定Hb的标准方法 也是参考方法（WHO） 氰化高铁血红蛋白法（HiCN法） 1.原理 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰化钾的氰根（CN-）生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。其在540nm有吸收峰。特定标准条件下，其毫摩尔消光系数为 44L/（mmol.cm），可测得 吸光度并计算Hb（g/L）。 A/44×64458（mg）/1000×251=A×367.7 但在实际工作中，一般实验室的分光 光度计达不到WHO规定的标准条件，所以利用Hb参考液制备标准曲线，或算K (K=∑Hb/∑A)值，间接计算出Hb（G/L）。 氰化高铁血红蛋白法（HiCN法） 2、质量保证 （1）试剂的保管，因有剧毒，废液集中处理。 （次氯酸钠） （2）仪器的校正（波长、灵敏度、比色杯等）。 （3）标准曲线的定期校正。 （4）高球血症、高WBC等致标本混浊，有干扰。 （适当加氯化钠） 3、方法学评价 HiCN法 优点：1、快速、简便。显色快且稳定。 2、易质控，质控物稳定。 3、结果准确，其它方法均要用此法校正， ICSH推荐且被WHO确定为参考方法。 缺点：不能转化SHb，转化HbCO慢，高球蛋白 与高WBC有干扰，并有剧毒。 Hb测定其它方法及评价 1） SDS-Hb法（十二烷基硫酸钠法）次选方法 ? （无毒、准确、但能破坏WBC） 2）HiN3法（叠氮高铁血红蛋白法） ? （毒性小、较准确、但对HbC