多肽荧光探针的在蛋白质检测中的应用.pdf

中国科学: 化学 2013 年 第43 卷 第8 期: 1013 ~ 1021 SCIENTIA SINICA Chimica SCIENCE CHINA PRESS 评 述 多肽化学专刊 多肽荧光探针在蛋白质检测中的应用 * 黄志平 , 田兴涛, 吴为辉, 张鸣 北京防化学院生化防护系, 北京 102205 *通讯作者, E-mail: hzp03@ 收稿日期: 2013-04-25; 接受日期: 2013-05-19; 网络版发表日期: 2013-06-20 doi: 10.1360/032013-179 摘要 荧光探针法是痕量蛋白质检测的重要方法, 其中多肽荧光探针得到了广泛的应用. 本 关键词 文综述了 3 种主要类型多肽荧光探针，即单荧光标记探针、双荧光标记探针和与其他材料形成 多肽 荧光探针 复合物的探针的结构特点、检测原理以及不同类型多肽荧光探针在蛋白质定性、定量检测和酶 蛋白质 活性测定等方面的应用, 并对多肽荧光探针的未来发展方向进行了展望. 检测 1 引言 检测目标蛋白的目的. 多肽荧光探针检测目标蛋白 主要采用 3 种策略: (1) 单荧光标记, 荧光标记多肽 蛋白质是生命活动的物质基础, 在生命现象和生 与目标蛋白结合使目标蛋白获得荧光标记; (2) 双荧 命过程中起决定性的作用. 机体细胞中种类繁多的蛋 光标记, 标记后的多肽并不显示荧光, 受目标蛋白作 白质各具不同的生理功能, 从而使细胞对胞外信号做 用后荧光激活; (3) 单荧光标记多肽与其他材料构成 出不同的生物学反应. 蛋白质之间的相互作用能够整 复合材料, 同样也不显示荧光, 受目标蛋白作用后荧 合来自不同信号通路的信号并协调细胞内部的调节机 光激活. 3 种多肽荧光探针均以发生荧光作为检测蛋 制[1]. 实现蛋白质准确灵敏的检测, 对生命奥秘的揭 白质的信号, 因而可以用于靶向蛋白的分子成像, 成 示、疾病诊治和药物筛选等领域均具有重要意义. 为现代诊断中不可缺少的技术[3], 提供疾病信息精确 自蛋白质组学(proteomics)诞生以来, 建立简单、 和专一的诊断. 灵敏、快速、特异性强、高通量的蛋白质检测方法, 受 到越来越多的关注, 已成为分析科学的研究重点之 2 单荧光标记多肽探针 一. 荧光检测法因其具有灵敏度高、选择性好、动态 响应范围宽和测定条件更接近生命体生理环境的优 目前发展的单荧光修饰基团有近 30 种, 应用较 点而在蛋白质检测中应用广泛. 荧光探针法以靶向 为广泛的是羧基荧光素(FAM)、硫氰酸荧光素(FITC)、 目标蛋白的荧光分子通过荧光增强或猝灭检测目标 丹磺酰氯(dansyl chloride)、2,4-二硝基苯(Dnp)、羧基 对象, 成为痕量蛋白质检测的重要方法. 新近的技术 罗丹明 110 (carbo-xyrhodamine110) 、德克萨斯红 产生