一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞生产Ad-IFNγ的-微生物学报.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 吴全德 等/一次性生物反应器悬浮培养HEK293 细胞生产Ad-IFNγ 的工艺 1787 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn November 25, 2014, 30(11): 1787−1791 DOI: 10.13345/j.cjb.140119 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 生物育种与工艺优化 HEK293 Ad-IFNγ 1 1,2,3,4,5 吴全德 ，黄文林 1 100101 2 510010 3 510663 4 510663 5 510663 . HEK293 Ad-IFNγ. , 2014, 30(11): 1787−1791. Wu QD, Huang WL. Producing Ad-IFN gamma by suspension culture of HEK293 cells in a disposable bioreactor. Chin J Biotech, 2014, 30(11): 1787−1791. 摘 要: 腺病毒载体是极具发展前景的基因治疗载体之一，为获得一条新型腺病毒规模化生产工艺，研究采用5 L 振荡激流式一次性生物反应器悬浮培养 HEK293 细胞来生产重组腺病毒载体。细胞经种子链逐步扩增后，接种至 AP10 生物反应器，采用 CD293 无血清培养基流加培养悬浮 HEK293 细胞，细胞密度达约2.0×106 个/mL 时，以 30 MOI (Multiplicity of infection) 感染重组Ad-IFNγ (Recombinant adenovirus-interferon gamma) ，48 h 后收获细胞，3 次冻融裂解离心收获上清病毒粗产品。采用壳蛋白免疫法快速测定粗产品滴度。结果表明，采用振荡激流式一次性 生物反应器，流加HEK293 细胞悬浮培养6 d ，密度可达2.0×106 个/mL ，Ad-IFNγ粗产量达 1.49×1013 IFU (Infectious unit) ，单细胞包装量达3 800 IFU/cell。采用阴离子交换层析法纯化重组腺病毒，回收率35.9%。建立了利用5 L 激 流式一次性生物反应器悬浮培养HEK293 细胞生产重组腺病毒载体Ad-IFNγ 的初步工艺。 : 重组腺病毒，HEK293 细胞悬浮培养，一次性生物反应器，分离纯化，阴离子交换层析 Producing Ad-IFN gamma by suspension culture of HEK293 cells in a disposable bioreactor 1 1,2,3,4,5 Quande Wu , and Wenlin Huang 1 Institute of Microbiology Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China 2 Sun Yat-sen University Cancer Center, Guangzhou 510010, Guangdong, China 3 Guangdong Provincial Key Laboratory of Tumor-targeted Drug, Guangzhou 510663, Guangdong, China 4 Guangdong Provincial Development and Reform Commission Key Laboratory of Gene Medicine, Guangzhou 510663, Guangdon