等电点除蛋白的pH值对螺旋藻酸性多糖硫酸基团-中国科技论文在线.PDFVIP

药 物 生 物 技 术 PharmaceuticalBiotechnology 2004，11(6)：381～384 38l 等电点除蛋白的pH值对螺旋藻酸性多糖硫酸基团含量的影响 陈 昕，尹鸿萍 ，王 吴 (中国药科大学微生物教研室，江苏南京 210009) 摘 要 考察等电点除蛋白对螺旋藻酸性多糖的硫酸根含量的影响。采用热碱水提取，乙醇沉淀，CPC络 合得螺旋藻酸性多糖。硫酸苯酚法测定糖含量，聚丙烯酰胺凝胶电泳和氯化钡明胶法检查硫酸根，200~400nm 紫外扫描及水解氨基酸检测蛋白。结果表明．不同酸化条件对螺旋藻酸性多糖的硫酸根含量有明显的影响，以 pH值4．0去除蛋白效果最佳，硫酸根保留相对较多。 关键词 螺旋藻；多糖 ；硫酸根 中图分类号：Q539 文献标识码 ：A 文章编号：1005—8915(2004)06—0381—04 硫酸化多糖 (SulfatedPolysaccharides，SP)， 蛋白类杂质，最大限度地保留活性必需的硫酸根成 或称多糖硫酸酯，是多糖大分子链中单糖分子 为提取工艺的关键 。由于螺旋藻中酸性蛋白较多， 上的羟基被硫酸根所取代而形成的一类多功能 因此本文对等电点除蛋 白时的不同pH值对多糖 生理活性物质。SP具有广泛的生物学活性 ，包 硫酸根含量影响进行考察。 括抗肿瘤、对免疫系统作用和抗凝活性等，近十 1 实验试剂与仪器 几年来人们又发现 SP具有抗病毒活性。美国 国家癌症研究所对海洋无脊椎动物筛选发现， 葡萄糖，Sigma进 口分装；丙烯酰胺、甲叉丙烯 其水相提取物显示了高百分率 (23 )的抗 HIV 酰胺，BBI进 口分装；过硫酸铵，N，N一四甲基乙二 活性 ，而这些活性组分基本是硫酸化多糖 ，而且 胺(TEMED)、甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷 (Tris)， 许多提取物显示出类似硫酸葡聚糖和其他硫酸 Amresco进 口分装；硫酸化葡聚糖DE一1(平均分子 多糖 的生物学特性 。构效关系研究的结果表 质量10kD)，Sigma公司；AmberlitelRA-900C1强 明，这类多糖的抗病毒活性首先源于其聚阴离 碱型阴离子交换树脂，Fluka公司；其他试剂均为 子特性，而其聚阴离子特性又主要源于分子 中 国产分析纯。 R-201旋转蒸发器、数显恒温水浴，上海 申胜 的硫酸基 。研究发现，有的 自身无抗病毒活性 生物技术有限公司；752一N紫外光栅分光光度计， 的多糖经硫酸化后，表现出抗病毒活性 ；而有抗 上海精密仪器厂；循环水式真空泵，郑州长城科工 病毒活性的硫酸多糖脱去硫酸根后，失去抗病 贸有限公司；可控硅控温水浴锅，江苏南通嘉程仪 毒活性 ，足见硫酸根对于多糖抗病毒活性 的重 器有限公司；真空干燥箱，上海实验仪器总厂。 要性 。 EPS604电泳仪、DYCP一31A水平电泳槽 (胶板面 螺旋藻酸性多糖 (AcidicPolysaccharideof 积 9．0cmX9．0cm)，北京市六一仪器厂；DYY一Ⅲ Spi