离心技术专题讲座PPT.pptVIP

分析室：容量为1毫升,呈扇形排列在转子中。其有上下二个平面的石英窗,离心机中装有的光学系统可保证在整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质, 通过对紫外光的吸收或折射率的不同对沉降物进行监视。 * 1.测定生物大分子的相对分子重量 3.分析生物大分子的构象变化 2.生物大分子的纯度估计 应用范围 * 内容回顾 离心的基本原理 离心力 相对离心力 沉降系数 沉降速度 沉降时间 离心设备的分类 转速：低速、中速、高速 转子：角转子、水平转子、垂直转子等 用途：实验室用、工厂用 离心形式：离心过滤、离心沉降、离心分离 * 离心分离法 差速离心法 速率区带离心法 等密度离心法 密度梯度溶液的制备 梯度溶液的选择原则 1、与被分离的生物材料不发生反应。 2、可达到要求的密度范围； 3、不会对离心设备发生腐蚀作用。 4、容易纯化,价格便宜或容易回收。 5、浓度便于测定,如具有折光率。 6、物理性质,热力学性质应该是已知的。 * 常用的梯度材料 蔗糖 聚蔗糖 氯化铯 硅溶胶 离心机使用的注意事项 平衡离心管和其内容物。 离心管装液不可超过管容量的2/3，尤其是角转子。 在温下离心时，转头需预冷。 离心过程中不得随意离开离心机盖。 转头不得过速使用。 * 谢谢！ * 4、区带转头： 1、无离心管；由转子桶和可旋开的顶盖组成。 2、转子桶内装有十字形隔板，把桶内分隔成多个扇形小室，隔板内有导管； 3、区带转头的“管壁效应”极小，分离效果好，转速高，容量大，回收容易； 区带转头的样品及介质与转头直接接触，要求转子耐腐蚀，并且操作复杂。 特点： 缺点： * * 5、连续转头： * 自动排出沉渣的离心澄清机 * 分批自动排出沉渣的离心澄清机 * （三）根据用途分类： 实验室或工厂、分析或制备 * （四）根据离心形式分类： 离心过滤：指在有孔转鼓的离心机中通过过滤介质分离悬浮液的过程。 离心沉降：利用固液两相比重的差异在离心机无孔转鼓或离心管中进行悬浮液沉降的过程。 离心分离：利用不同溶质颗粒在液体各部分分布的差异，分离不同比重的液体的过程。 * （五）根据结构特点分类： 转子形状：角式、外摆、管式、碟片式 转轴位置：直立、水平、倾斜 驱动方式：手摇、气动、磁悬、电动 * 操作方式：连续、半连续、间歇 卸料方法：人工、重力、刮刀、振动、蠕动泵、喷嘴、螺旋等 使用温度：冷冻和常温 * 三.离心分离方法 根据离心原理,按照实际工作的需要，目前已有可设计出各种离心方法综合起来大致可分三类 离心分离法 平衡离心法 沉降平衡离心法 差速离心法 速率区带离心法 等密度离心法 * * 1.平衡离心法  根据粒子大小、形状不同进行分离。 差速离心法(differential velocity centrifugation) 速率区带离心法(rate zonal centrifugation)。 2.等密度离心法(isopynic centrifugation)  又称等比重离心法,依粒子密度差进行分离,等密度离心法和上述速率区带离心法合称为密度梯度离心法。 3.经典式沉降平衡离心法 用于对生物大分子分子量的测定、纯度估计、构象变化。 * (一).差速离心法1、原理  利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别,在同一离心条件下,沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分步沉淀。  差速离心的分辨率不高,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于其他分离手段之前的粗制品提取。 2.注意点：?可用角式、水平式转头?可用刹车?难以获得高纯度 * ? 例用差速离心法分离已破碎的细胞各组份 已破碎的细胞 500g,10分钟   沉淀 上清液 (细胞核） 10,000g,10分钟  沉淀 上清液 (细胞膜碎片,线粒体,) 100,000g,3小时 溶酶体   沉淀 上清液 (核糖核蛋白体） (可溶性成份)? * (二).速率区带离心法1.原理  离心前离心管内先装入密度梯度介质,