寡糖链的研究进展.doc

·综 述· 寡糖链的研究进展α 涂宣林 宋后燕 (上海医科大学分子遗传研究室, 上海 200032) 摘 要: 糖蛋白糖链的合成受很多因素影响, 本文着重讨论宿主因素的影响, 同时也讨论 寡糖链对糖蛋白的抗原性和血浆清除率的影响。 关键词 寡糖链; 宿主细胞; 抗原性; 血浆清除率 哺乳类细胞分泌的蛋白质多为糖蛋白, 这些寡糖链通过 A sn 侧链 ( 即 N 22连接) 或 T h r, Se r 侧链 ( 即 O 2连接) 与蛋白共价结 合, 糖蛋白上可有 N 2连接或 O 22连接, 或两 者俱有。 寡糖链对糖蛋白的抗原性、生物活 性、溶解性、热稳定性和抗蛋白水解酶的能 力均有很大影响, 由于核磁共振 (NM R ) 技 术的广泛使用, 对寡糖链与多肽的作用机制 有进一步了解1, 2 究 表 明: 肽 链 的 合 适 空 间 结 构 有 助 于 糖 化3, 4 。 长萜醇相连的寡糖在寡糖转移酶作 用下转移给正在延长的多肽链。亦有极个别 例 外 如 蛋 白 C 的 糖 化 位 点 为 A sn 22X 22 C y s5 。 在内质网经外源性糖化酶作用下进 行一系列的修饰加工, 最终在高尔基体经外 源性糖化酶和糖基转移酶催化合成高甘露 糖型、杂合型和复杂型。 酵母、昆虫、植物和哺乳类细胞在内质 网中的糖化过程是相似的, 但寡糖链在内质 网和高 尔基体中的剪切加工方式不一样, 即 G lc3M an 9 G lcN A c2 式 P 2P 2D o l 的粘附和 剪切为M an 8 G lcN A c2 的方不同; 植物细胞的 复杂型糖链含有 G lcN A c 和 Ga l, 此与哺乳 类细胞相似, 但不含唾液酸和复杂型结构 核, 此外植物细胞源性N 22连接寡糖常含有 木糖和一些在哺乳类细胞中常见的单糖链。 酵母细胞在高尔基体中的糖化方式与 哺乳类细胞亦有明显的区别, 大多数酵母细 胞如 S a cch a rom y ces ce rev isc ia c 的寡糖链延 伸加工是通过甘露糖的迭加, 有时甘露糖可 超过 50 个, 故用酵母细胞表达哺乳类细胞 的糖蛋白时其分子量巨大, 如无糖型 H IV gp 120 的分子量为 120KD , 在 S. ce rev is ia e 中 表 达 则 有 600KD , 应 用 突 变 型 S. ce rev is ia e 突变株合成 H IV gp 120 的糖链稍 1 N 22连接寡糖链形成的影响因素 N 22连接糖化常见于酵母、植物、昆虫和 哺乳类细胞, N 2连接糖蛋白合成的特征是多 肽链的延长和糖链的合成是同步进行的, 而 且需要长萜醇 ( do licho l) 作为糖链的载体, 长萜醇是由许多异戊醇单位连接而成的长 链脂肪醇, 长萜醇通过焦磷酸连接糖基, 合 成开始时在糖基转移酶作用下, 先将 U D P G lcN A c 的 G lc N A c 转移至长萜醇, 然后逐 个加糖基, 寡糖合成后其组成通常为 G lc3 M an 9 G lcN A c2 2P 2P 2D o li。在内质网与新形成 的多肽链三肽顺序 (A sn 22X 22Se r?T h r) 处接 触, 提示肽链的空间构象决定了 N 22连接糖 化, D av is 等学者发现 N 22连接糖蛋白中的 G lc N A c 的乙酰胺基与肽链的邻近基团形 成氢键, 稳定糖蛋白, A n n e 等应用NM R 研 α 收稿日期: 1997208209  长于哺乳类细胞表达的分子, 以致两者分子 量均为 120KD 6, 7 。 目前对昆虫细胞高尔基体中N 22连接糖 化机制知之甚少。与哺乳类细胞糖蛋白的加 工类似, S p od op t te ra f ru g ip e rd a ( sf 9) 细胞 具 有 把 G lc3 M an 9 G lcN A c2 加 工 为 M an 8 G lcN A c2 的能力8 , 然而进一步加工却与哺 乳类细胞不一样。通常应用 sf9 细胞表达外 源性糖蛋白时其分子量常低于哺乳类细胞 中表达的相应糖蛋白, 提示 sf9 细胞中糖基 转移酶的活性受到一定程度的限制, 如无糖 基 E PO 的分子量为 1814KD , 而 CHO 细胞 表达 E PO 分子量大小为 35KD , sf9 细胞分 泌的 E PO 分子量为 2612KD , 其它如 t2PA , 流感病毒凝聚素, Α半乳糖苷酶和 Β2干扰素 在 sf9 细胞中的分子量均比哺乳类细胞合成 的小9 。 M an ) 使甘露糖与 T h r 或 Se r 残基相连。O 22 连接糖化无确定的位点, 如重组 H IGF 2