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2017-12-19 发布于河北
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体外转录过程中遇到的问题及探讨

2 1 V o l. 21, N o. 3 2005 3 NATURAL SCIENCES JOURNAL OF HARBIN NORM AL UN IV ERSITY 袁红梅陶雷赵丽娟王同昌 ( ) 人们在做原位杂交sou hem b lo s 或nor hem b lo s时, RNA 探针比 DNA [ 1] 探针稳定且特异性强 , 产生的讯号比 DNA 探针强约 10倍, 因此通常 RNA 探针为实验者的首选. 本人在用 SP6 RNA 聚合酶体外转录合史氏鲟 B - ac in 基因的 RNA 探针时, 转录产物电泳后出现四条带, 分别位于模板的上端和下端. 为了探究其中的原因, 本人选择了可能影响转录产物长度的几个因素( RNA 聚合酶模板具有 3! - 凸头以及模板的长度)分别设计实验进行分析, 结果发现不同的 RNA 聚合酶以及模板过短可能形自连等都有可能影响转录产物的结果. : 体外转录; 史氏鲟; RNA 聚合酶; 3!- 凸头 , RNA 0 引言 , RNA DNA RNA . ( Prom ega) . , DNA , 1 材料和方法 SP6T 7 T 3RNA 1. 1 [ 2] . RNA PCR . . , , 1. 2 , ( ) 1. 2. 1 ; RNA , RNA T rizo l ( In RNA . , vi rogen), B - RNA . ac in B- ac in- L, 5! , , - TCAGTGAGCAGGA CGGGGTG - 3; B - ac in - RNA ; U, 5 - CGGTTTCGCTGGAGATG - 3.RT - PCR GC , RNA ( 1 g ), supercrip . ∀( Inv i rogen ) cDNA , , , B- ac in- L B- ac in- U , 3!- , 3!- T aq PCR . : 2005- 04- 5 3 91 DNA , pGEM - T ( P rom ega), , , , DNA, . 1. 2. 2 SP6RNA RNA , SP6, 5!- CAT A CGATTTAGGTGACACTATAG - 3 B - ac in- U , T aq PCR , PCR , SP6 RNA () ( 20 L