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co2培养箱消毒方法 如果是隔水式培养箱可以采用甲酸熏蒸（甲醛与高锰酸钾反应生成甲酸），然后再用75％酒精擦培养箱内壁即可，效果比较好。如果是气套式的培养箱用75％酒精直接擦培养箱内壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先将二氧化碳和温度探头封闭好，防止甲酸腐蚀。 CO2培养箱是实验室必备的仪器，但因其中需放置盛水容器而湿度较高，从而导致霉斑（经培养鉴定为丝状真菌）快速生长而影响工作，有碍观瞻和可能导致试验样本污染或院内感染扩散。虽使用了硫酸铜溶液、75％乙醇溶液或紫外线照射等多种消毒措施，仍然没有显著的效果。我们从文献和实践中发现，一般认为不适合在这种情况下使用的市售高氯消毒片当加大剂量和使用中和剂时，具有安全和彻底的去除这类霉斑的效果 无菌操作 发表于：2007年11月24日 16时14分55秒来源：阅读(2)评论(0) 举报本文链接：/306039595/blog/1195892095 无菌操作 (1)实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70% 酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染.实验结束后,将实验物品带出工作台.如需要继续进行下一个实验,则用70% 酒精擦拭无菌操作台面,再让无菌操作台风机运转10分钟后,才可进行下一个实验操作. (2)无菌操作工作区域应保持清洁与宽敞,必要物品,如试管架,移液器或吸管头等可以暂时放置,其它实验用品用完后应及时移出,以利气体流通.实验用品要用70%酒精擦拭后才能带入无菌操作台内.实验操作应在操作台中央无菌区域内进行,勿在边缘非无菌区域操作. (3)小心取出无菌实验用品,避免造成污染.切勿碰触吸管与吸头头部或容器瓶口,不要在打开的容器正上方操作实验.容器打开后,用手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放在台面上. (4)工作人员应注意自身的安全,必须穿戴实验衣与手套后才进行实验.对于来自人源性或病毒感染的细胞株应特别小心,并选择适当等级的无菌操作台(至少两级).操作过程中,应避免引起气溶胶的产生,小心有毒性试剂,例如DMSO及TPA等,并避免尖锐物品伤人等. (5)定期检查下列项目:CO2钢瓶内的CO2压力;CO2培养箱内的CO2浓度,温度,及水盘是否有污染;无菌操作台内气流压力是否正常,定期更换紫外灯管及HEPA过滤器滤膜,预滤网（300小时/预滤网,3000小时/HEPA). 常规组织初代消化培养 发表于：2007年11月24日 14时42分2秒来源：阅读(0)评论(0) 举报本文链接：/306039595/blog/1195886522 常规组织初代消化培养 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 细胞培养规程 发表于：2007年11月24日 14时18分38秒来源：阅读(0)评论(0) 举报本文链接：/306039595/blog/1195885118 细胞培养规程 一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。 二、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一