犬瘟热病毒原液TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立.docVIP

犬瘟热病毒原液TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 魏斌 田一男 李平 石梅 曹雪峰 肖启程 涂蕊 但佳明 杨亭玉 彭广能 钟志军 四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室 邛崃市农业和林业局 绵阳市经开区动物疫病预防控制中心 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 为建立一种不提取病毒RNA, 直接采用Taq Man荧光定量RT-PCR检测样本上清液中犬瘟热病毒的方法。通过扩增CDV的NP基因部分片段构建重组质粒, 建立Taq Man荧光定量PCR方法, 对所建立的方法进行特异性、敏感性、重复性检测;比较了提取核酸后进行荧光定量RT-PCR与不提取核酸对原液进行荧光定量RT-PCR检测的结果, 最后对疑似CDV病料进行检测。结果显示, 建立的CDV质粒Taq Man荧光定量PCR检测灵敏度比普通PCR灵敏度高1 000倍。将核酸提取液和病毒原液稀释后用该研究建立的方法进行检测, 最小检测稀释倍数分别为107和105, 表明提取核酸后样本中的有效c DNA浓度比直接使用病毒原液检测高100倍。特异性和重复性检测结果表明, 该方法特异性良好且重复性较高。对97份临床病料进行检测, 建立的方法共检出60份阳性, 阳性检出率高于普