生物化学---第四章　酶（下）.pptx

第三节　酶代谢动力学一 研究内容： 酶促反应动力学研究酶促反应的速度以及影响速度的各种因素的科学。　 酶促反应的影响因素主要包括酶的浓度、底物的浓度、pH、温度、抑制剂和激活剂等。 二、影响反应速度的因素(一)酶的浓度VVmax[S]当底物浓度较低时反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。VVmax[S]随着底物浓度的增高反应速度不再成正比例加速；反应为混合级反应。VVmax[S]当底物浓度高达一定程度反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应。（二）.底物浓度[S]1.酶促反应速度V与底物浓度[S]的关系底物浓度对反应速度的影响单底物、单产物反应酶促反应速度一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度底物浓度远远大于酶浓度 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反应的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程。2.Michaelis-Menten方程和米氏常数 Michaelis 与 Menten 发展出酶作用动力学MichaelisMentenNelson Cox (2000) Lehninger Principles of Biochemistry (3e) p.2581 中间产物学说(1903年Henri Wurtz提出)p355在酶催化的反应中，第一步是酶与底物形成酶－底物中间复合物。当底物分子在酶作用下发生化学变化后，中间复合物再分解成产物和酶。 E + S ==== E-S ??? P + E 许多实验事实证明了E－S复合物的存在。E－S复合物形成的速率与酶和底物的性质有关。过氧化物酶催化过氧化氢分解反应时,过氧化物酶本身具有645,583,548, 498nm四个吸收峰,当反应发生时,光谱性质完全发生改变,只有561,530.5nm两个吸收峰,反应完成后又恢复成原来的四吸收峰光谱性质.?E1ES能量水平?E2E+S?GP+ E反应过程 酶（E）与底物（S）结合生成不稳定的中间物（ES），再分解成产物（P）并释放出酶，使反应沿一个低活化能的途径进行，降低反应所需活化能，所以能加快反应速度。 酶催化作用的本质是酶的活性中心与底物分子通过短程非共价力(如氢键,离子键和疏水键等)的作用，形成E-S反应中间物， 其结果使底物的价键状态发生形变或极化，起到激活底物分子和降低过渡态活化能作用。 (1)米氏方程的推导1913　米氏方程的三个假设：　（1）快速平衡：　①反应初期，产物的生成量极少，E+P→ES可忽略不计；　② 〔S〕 〔E〕,[S]-[ES] ≈[S]　③反应系统处于快速平衡状态，即〔ES〕生成产物的速度可以忽略不计1925　米氏方程的三个假设：　（1）稳态平衡：　①反应初期，产物的生成量极少，E+P→ES可忽略不计； ② 〔S〕 〔E〕,[S]-[ES] ≈[S] ③反应系统处于稳态平衡状态，即〔ES〕的形成速度等于〔ES〕的分解速度：2 米氏方程的推导： 根据中间产物学说，酶促反应分两步进行:3 米氏常数的意义及测定当反应速度等于最大速度一半时,即V = 1/2 Vmax, Km = [S]上式表示,米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度。因此,米氏常数的单位为mol/L。米氏方程Km 即为米氏常数，Vmax为最大反应速度V为实际反应速度2.1 米氏方程的意义　Km是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶浓度无关。 （1）鉴定酶：通过测定Km，可鉴别不同来源或相同来源但在不同发育阶段，不同生理状态下催化相同反应的酶是否是属于同一种酶。（2）判断酶的最适底物；（3）1/km 近似代表酶对底物的亲和力；　（4）指出了[S]与V的关系，利于计算；5）判断代谢的方向； （6）计算一定速度下底物浓度；（7）了解酶的底物在体内具有的浓度水平；（8）判断抑制类型。2.2关于米氏常数Km的几点说明：不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数。Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下的同一种酶具有不同的Km值。Km值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。（同一种酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物） 2.3米氏常数的测定（1）s-v（2）双倒数作图法 Vmax · [S]v = ——————km + [S]计算一定速度下底物浓度从米氏方程中求得：当反应速度达到最大反应速度的90%，求底物浓度90%V =100%V[S]/(km +[S])即 [S] = 9k